PrimaCell™大鼠子宮平滑肌細(xì)胞試劑盒培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

產(chǎn)品名稱	PrimaCell™大鼠子宮平滑肌細(xì)胞試劑盒培養(yǎng)
英文名稱
貨號(hào)	EYX99664

PrimaCell™大鼠子宮平滑肌細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

英文名稱HumapPELISAKit人血栓前體蛋白(TpP)規(guī)格：96T/48T  911819-08-4OphiopojaponinC  Ophiopojaponin C

化線粒體蛋白質(zhì)濃度定量測(cè)定試劑盒20  19885-10-0澤瀉醇A說(shuō)明書(shū)  Alisol A

RatInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA試劑盒大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  18674-16-3澤瀉醇A-24-醋酸酯品牌  Alisol A 24-acetate

小鼠再生基因蛋白1a(REG-1a)ELISA試劑盒 ，英文名： REG-1a ELISA Kit  17306-46-6野漆樹(shù)苷規(guī)格  Rhoifolin

小鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA檢測(cè)試劑盒MousecoagulationfactorⅡ,FⅡELISAKit 96T/48T  122413-01-8雞屎藤苷酸甲酯  paederosidic acid methyl ester
2009-24-7花椒毒酚規(guī)格  Xanthotol   英文名稱RatNN-T4ELISAKit大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)規(guī)格：96T/48T

20086-06-0黃獨(dú)素B品牌  Diosbulbin B   英文名稱RatniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠合成酶(NOS)規(guī)格：96T/48T

20086-06-0黃獨(dú)素B規(guī)格  Diosbulbin B    英文名稱RatniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠合成酶(NOS)規(guī)格：96T/48T

19908-48-6高麗槐素品牌  Maackiain   英文名稱RatNF-kBELISAKit大鼠NF-kB規(guī)格：96T/48T

19906-72-0蜂斗菜內(nèi)酯說(shuō)明書(shū)  Bakkenolide   英文名稱RatneuropeptideYELISAKit小鼠神經(jīng)肽(NPY)規(guī)格：96T/48T
小鼠轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)ELISA試劑盒 ，英文名： ATF5 ELISA Kit  66575-29-9佛司可林規(guī)格  Forskolin

犬雌二醇(E2)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T  29070-92-6茯苓酸  Pachymic acid

犬胸腺基質(zhì)細(xì)胞生成素(TSLP)試劑盒 Dog TSLP ELISA Kit  303-98-0輔酶Q10說(shuō)明書(shū)  Coenzyme Q10

英文名稱Humaissue-typePlasminogenActivator(t-PA)ELISAkit人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  58749-22-7甘草查爾酮A品牌  Licochalcone A

*AP酶聯(lián)檢測(cè)封閉溶液10毫升  58749-23-8甘草查爾酮B規(guī)格  Licochalcone B
PrimaCell™大鼠子宮平滑肌細(xì)胞試劑盒培養(yǎng)6812-81-3櫟癭酸規(guī)格  Roburic acid   組蛋白H3-S311酸化檢測(cè)試劑盒10/20等

6807-83-6三葉豆紫檀苷品牌  Trifolirhizin  組蛋白H3-S281酸化檢測(cè)試劑盒10/20等

6807-83-6三葉豆紫檀苷  Trifolirhizin   組蛋白H3-S101酸化檢測(cè)試劑盒10/20等

68027-15-64補(bǔ)充中2品牌  hederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-(β-D-glucopyranosyl(1→4))-α-L-arabinopyranoside   組蛋白H3-K9甲基化共沉淀分析試劑盒5

67979-25-3橙黃決明素品牌  Aurantio-obtusin   組蛋白H3-K9(mono/di/i)甲基化檢測(cè)試劑盒10/20等

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。