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細胞系凍存程序
閱讀:1667 發布時間:2016-9-28細胞系凍存程序:
1) 單層細胞的消化。將經24~48小時培養已長成單層的傳代細胞培養物棄去生長液,加適量ATV,1~2分鐘后倒棄ATV,再加入少量ATV液,經0.5~1分鐘倒去ATV,室溫或37oC溫箱作用2~3分鐘,視細胞解離情況,拍打細胞培養瓶。使單層細胞*解離。SP2/0瘤細胞,待生長好后用吸管吹打,再經1 000轉/ 分離心lO分鐘。
2) 離心洗滌:向培養瓶內加5~1 0m1預冷的MEM使細胞懸浮,再將其吸出置滅菌離心管中,以1 000rpm 離心8~10分鐘后棄去上清液。
3) 細胞懸液的制備:向離心管內逐滴緩慢加入預冷的凍存保護液,使細胞濃度為150~400萬/ml,然后迅速分裝于安瓿瓶中,每瓶加量為lml。