PrimaCell™大鼠皮下脂肪細胞試劑盒培養在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

PrimaCell™大鼠皮下脂肪細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

產品名稱	PrimaCell™大鼠皮下脂肪細胞試劑盒培養
英文名稱
貨號	EYX99688

 

 

 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

RatannexinⅤ,ANX-ⅤELISAKit大鼠膜聯蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒規格：96T/48T  470-37-1華蟾毒精  Cinobufagin

組蛋白H2A-K9乙酰化檢測試劑盒10/20等  557-61-9二十八烷醇說明書  Octacosanol

Mousealpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISA試劑盒小鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒規格：96T/48T  14937-32-71,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖品牌  1,2,3,4,6-pentagalloylglucose

小鼠孕酮(PROG)ELISA試劑盒 ，英文名： PROG ELISA Kit  478-61-5小檗胺規格  Berbamine

小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA檢測試劑盒Mouseulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit 96T/48T  7437-54-9甲基辛弗林鹽酸鹽  4-hydroxyephedrine
140147-77-9朝藿定A1說明書  Epimedin A1   英文名稱RatGlycogenphosphorylaseIIELISAKit大鼠糖原1酸化酶同工酶II(GPII)規格：96T/48T

140147-77-9朝藿定A1規格  Epimedin A1   英文名稱RatGlycogenphosphorylaseIIELISAKit大鼠糖原1酸化酶同工酶II(GPII)規格：96T/48T

13-去羥基印烏堿規格  13-Dehydroxyindaconintine   英文名稱RatGlycogenphosphorylaseBBELISAKit大鼠糖原1酸化酶同工酶BB(GPBB)規格：96T/48T

139-85-5原兒茶醛說明書  protocatechuic aldehyde  英文名稱RatGlycogenphosphorylaseBBELISAKit大鼠糖原1酸化酶同工酶BB(GPBB)規格：96T/48T

139-85-5原兒茶醛說明書  3,4-Dihydroxybenzaldehyde   英文名稱RatGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptideELISAKit大鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒規格：96T/48T
英文名稱HumanInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1ELISAKit人胰島素樣生長因子結合蛋白1(IGFBP1)規格：96T/48T  518-69-4延胡索甲素品牌  Corydaline

化人體RUNX3基因重組表達載體(pCMV5-RUNX3)測序引物對2OD  6024-85-7延胡索乙素規格   Tetrahydropalmatine

RatHydrocoisone,HYDELISA試劑盒大鼠(HYD)ELISA試劑盒規格：96T/48T  437-64-9芫花素  Genkwanin 

小鼠整合素αM(ITGαM)ELISA試劑盒 ，英文名： ITGαM ELISA Kit  477-90-7巖白菜素說明書  Bergenin

內(ET)ELISA檢測試劑盒Monkeyendotoxin,ETELISAKit 96T/48T  10605-02-4鹽酸巴馬汀品牌  Palmatine
PrimaCell™大鼠皮下脂肪細胞試劑盒培養86632-03-33,4,5-三咖啡?？鼘幩?/span>  3,4,5-Tricaffeoylquinic acid   組織PAK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

865-21-4長春堿規格  vinblastine   組織P38β2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

865-21-4長春花堿說明書   Vinblastine   組織NEK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

861691-37-4葒草素-2"-0-B-L半乳糖苷說明書  2"-O-beta-L-galactopyranosylorientin   組織NADP依賴性甘油-3-1酸脫氫酶(NADP-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NADP-GAPDH)活性光譜法定量檢測試劑盒20

860-79-7黃楊堿  Cyclovirobuxin D   組織NADPH氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒20/50(10樣本)