大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

產(chǎn)品名稱	大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物
英文名稱	Rat Aorta：Normal Aortic Endothelial Cell Derivatives
貨號	EYX99231

大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物【Rat Aorta：Normal Aortic Endothelial Cell Derivatives】

大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取的，大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞從正常大鼠主動脈組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

紅霉素 ELISA試劑盒96TMethyl (9Z,11E)3-hydroxyoctadeca,11-dienoate98375

喹乙醇 ELISA試劑盒96TMethyl (3R)-(tert-butyldimethylsilyloxy)-oxo-triphenylphosphoranylidenehexanoate1471185

土霉素 ELISA試劑盒96TMethoxydienone23227沃氏物

強(qiáng)力霉素（多西環(huán)素） ELISA試劑盒96TMethenolone enanthate32美替諾龍庚酸酯

氨基糖苷類 ELISA試劑盒96TMethenolone acetate4345美替諾龍醋酸酯
Humanai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgAELISAKit 人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  11β,17α-Dihydroxy-6α-methylpregna-1,4-diene-3,20-dione  中文名：  分子式：C22H30O4  度：98.0%

Humanai-deoxyribonucleaseB,ai-DNaseBELISAKit 人抗DNA酶B抗體(ai-DNaseB)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  1,2,3-Triacetyl-5-deoxy-D-ribose  62211-93-2  中文名：  分子式：C11H16O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

Humanai-cenolandcenosomeaibody,ACAELISAKit 人抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  (R)-(-)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone  131685-53-5  中文名：(R)-(-)-4-芐基-3-丙酰基-2-惡唑烷酮  分子式：C13H15NO3  度：98.0%   

Humanai-BullousPemphigoid180aibody,BP180-AbELISAKit 人抗BP180抗體(BP180-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  1,2-Benzanthraquinone  中文名：1,2-苯并奎寧酮  分子式：C18H10O2  度：98.0%

Humanai-Bburgdorleriaibody,BB-AbELISAKit 人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  1,2-Bis(3-indenyl)ethane  18657-57-3  中文名：1,2-雙(3-茚基)乙烷  分子式：C20H18  度：98.0%  關(guān)鍵詞：
頭孢硫脒；先鋒霉素18號  Cefathiamidine  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR 人高糖基化人絨毛膜促性腺激素(hCG)試劑盒 Human hCG ELISA Kit

D-絲氨酸  H-D-Ser-OH  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA檢測試劑盒HumanMethemoglobin,MHBELISAKit 96T/48T

D-絲氨酸甲酯鹽酸鹽  D-Serine methyl ester hydrochloride   質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人高鐵血紅蛋白(MHB)試劑盒 Human Methemoglobin,MHB ELISA Kit

D-蘇氨酸  H-D-Thr-OH  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人高危型狀瘤病毒衣殼蛋白L1(HR-HPVL1)抗體(IgG)試劑盒 Human high risk papillomavirus L1-capsids(HR-HPVL1)aibody(IgG)ELISA kit

D-色氨酸甲酯鹽酸鹽  D-Tryptophan methyl ester hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：0.98 人高香草酸(HVA)ELISAKit人煙酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-乙酰-D-色氨酸  N-Acetyl-D-tryptophan   質(zhì)量規(guī)格：0.98 人高香草酸(HVA)ELISA試劑盒人煙酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

D-酪氨酸甲酯鹽酸鹽  H-D-Tyr-OMe·HCl  質(zhì)量規(guī)格：0.99 人高香草酸(HVA)試劑盒 Human Homovanillic acid,HVA ELISA Kit

2'-甲氧基腺;2'-O-甲基腺苷  2'-O-Methyladenosine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人睪酮(T)試劑盒 Human Testosterone,T ELISA Kit

D-纈氨酸  D-Valine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人庚型肝炎病毒(HGV)抗體(IgG)試劑盒 Human HGV IgG ELISA kit

2'-脫氧鳥苷-3'-單二鈉  2'-Deoxy-3'-guanylic acid di salt  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人庚型肝炎病毒(HGV)抗原試劑盒 Human hepatitis G virus (HGV) aigen ELISA kit
大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物人脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP4）ELISA試劑盒     2-Chloro-1-(5'-(prop-1-ynyl)-2,2'-bithiophen-5-yl)ethanol  114916-00-6  中文名：  分子式：C13H11ClOS2  度：98.5%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白elisa試劑盒   人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒、人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  2-Chloro-11-cyclopentyl-5H-benzo[e]pyrimido[5,4-b][1,4]diazepin-6(11H)-one  中文名：  分子式：C16H15ClN4O  度：98.0%

人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白（aFABP）ELISA試劑盒     2-Chloro-1-(5'-(prop-1-ynyl)-2,2'-bithiophen-5-yl)ethanol  114916-00-6  中文名：  分子式：C13H11ClOS2 

人脂肪酸結(jié)合蛋白elisa試劑盒   人脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒、人脂肪酸結(jié)合蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     2-Chloro-11-cyclopentyl-5H-benzo[e]pyrimido[5,4-b][1,4]diazepin-6(11H)-one  中文名：  分子式：C16H15ClN4O 

人脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)ELISA試劑盒     2-Carbamoyl-3-hydroxy-1,4-naphthoquinone  中文名：  分子式：C11H7NO4  度：%

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。