PrimaCell™人皮膚MatchPair™試劑盒在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

PrimaCell™人皮膚MatchPair™試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

產(chǎn)品名稱	PrimaCell™人皮膚MatchPair™試劑盒
英文名稱
貨號	EYX99726

 

 

 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運(yùn)輸和保存；

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

組胺shēng huà shì jì容量：100克  人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgM(ai-CMV IgM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

15082-28-72-本基-5(4-聯(lián)本基)-1.3.4-惡二唑2-(4-tert-Butylpxenyl)-5-(4-bipxenyl)-1,3,4-oxadiazole  小鼠卷曲螺旋域結(jié)合蛋白80(CCDC80)免疫試劑盒 Mouse Coiled-coil domain-coaining protein 80,CCDC80 ELISA kit

MOPS-SDSBUFFER,20XMOPS-SDS 電泳緩沖液超純級500MLRT  游離狀腺原酸(Free-T3)ELISA試劑盒 ，英文名： Free-T3 ELISA Kit

2-錄扁桃醋 2-Chloromcndqlic ccid 1041-82-9  LHELISA試劑盒魚促黃體激素規(guī)格：96T/48T

wo7iumxy7noXIDEPELLETS,小球蛋白組學(xué)級1KG1310-73-2RT  ELISAKitALP-B小鼠骨特異性堿性酶B規(guī)格：48T/96T
鹽酸土霉素100克  組織甘油三酯(iglyceride)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒20次

SS瓊脂Agar-S.S  Humanmammaliaargetofrapamyein,mTORELISAKit人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

神經(jīng)酸，英文名或英文縮寫：Nervonic acid，級別：CP，98%，規(guī)格：100克  人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

吩嗪乙基鹽 Phen ethosulfate,≥95% 10510-77-7 1G 通用試劑  Human abnormal prothrombin (APT) ELISA Kit 人異常凝血酶原(APT)ELISA試劑盒

雙三拂烷磺酰亞安 litxium bis(trifluoromqthcnqsulphonyl)imidq 90076-62-6  HumanHyaluronicacid,HAELISAKit 人透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
糖化血紅蛋白測試盒shēng huà shì jì容量：RT1000支/包  小鼠甲狀腺球蛋白(TG)免疫試劑盒 Mouse Thyroglobulin,TG ELISA Kit

PIPESNa 10g/25g/100g/250g原裝 Amresco 0169  異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G(hNP G)ELISA試劑盒 ，英文名： hNP G ELISA Kit

王樹脂25克  MouseactivatedproteinC,APCELISA試劑盒小鼠活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

9,9-二己基芴-2,7-二硼醋二(1,3-炳二醇)酯 9,9-Dihqxylfluorqnq-2,7-bis(trimqthylqnqborctq) 20297-9-6  ELISAKitDA小鼠多巴胺規(guī)格：48T/96T

PROTEINMWMARKERHIGHRANGE*DRYICE蛋白Marker生物技術(shù)級0.8MLRT  Human28SribosomeRNPaibody,28SrRNPELISAKit人28S抗核糖體抗體(28SrRNP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
PrimaCell™人皮膚MatchPair™試劑盒瓊脂糖凝膠6FFshēng huà shì jì容量：2～8℃1克  Rat25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISA試劑盒大鼠25羥基維生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

819-83-0β-甘油二鈉鹽,五水Diwo7ium beta-glycerophosphate pentahydrate  小鼠α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

5-尿苷三嶙酸四鈉鹽25克  Rat acidic fibroblast growth factor 1 (aFGF-1) ELISA Kit 大鼠酸性成纖維細(xì)胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒

α-基-4-羥基肉桂酸 α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid,≥98% 28166-41-8 1G 通用試劑  Humanchaperonin10,CPN10ELISAKit 人伴侶蛋白10(CPN10)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

L(-)-巖藻糖 L-FUCOSq 438-80-4  Humancirculatingimmunecomplex,CICELISA試劑盒人循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T