PrimaCell™人腎足突細(xì)胞細(xì)胞試劑盒在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

產(chǎn)品名稱	PrimaCell™人腎足突細(xì)胞細(xì)胞試劑盒
英文名稱
貨號(hào)	EYX99516

PrimaCell™人腎足突細(xì)胞細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

小鼠組蛋白脫乙酰酶(HDAC1)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC1 ELISA Kit  1258-84-0扁塑藤素說明書  Pristimerin

小鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA檢測試劑盒Mouseplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit 96T/48T  572-30-5扁蓄苷品牌  Avicularin

人抗氨酰NA合成酶,細(xì)胞質(zhì)(AARS)抗體試劑盒 Human ai alanyl-NA syhetase,cytoplasmic(AARS)aibody ELISA kit  表大戟二烯醇規(guī)格  Tirucallol

rabbitTissuePolypeptideAigen,TPAELISAKit組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1072-93-1表告依春  epigoitrin

載玻片細(xì)胞CYTOCHROMEC蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  490-46-0表兒茶素說明書  Epicatechin
86632-03-33,4,5-三咖啡酰奎寧酸  3,4,5-Tricaffeoylquinic acid   組織PAK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

865-21-4長春堿規(guī)格  vinblastine   組織P38β2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

865-21-4長春花堿說明書   Vinblastine   組織NEK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

861691-37-4葒草素-2"-0-B-L半乳糖苷說明書  2"-O-beta-L-galactopyranosylorientin   組織NADP依賴性甘油-3-1酸脫氫酶(NADP-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NADP-GAPDH)活性光譜法定量檢測試劑盒20

860-79-7黃楊堿  Cyclovirobuxin D   組織NADPH氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒20/50(10樣本)
Ratfibroblastgrowthfactor-10,FGF-10ELISA試劑盒大鼠成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF-10)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  64439-81-210-羥基喜樹堿品牌  10-Hydroxycamptothecin

小鼠組織蛋白酶S(CTSS)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSS ELISA Kit  13-去羥基印烏堿規(guī)格  13-Dehydroxyindaconintine

綿羊白介素1(IL-1)ELISA檢測試劑盒SheepIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T  473-08-5a-香附酮  α-Cyperone

犬胰島素樣因子3(INSL3)試劑盒 Dog insulin-like 3,INSL3 ELISA Kit  50-99-7D-無水葡萄糖說明書  D(+)-Glucose

英文名稱MouseApelin-12ELISAKIT小鼠Apelin-12規(guī)格：96T/48T  10284-63-6D-松醇品牌  D-Pinitol
PrimaCell™人腎足突細(xì)胞細(xì)胞試劑盒141433-60-5鹽酸小檗堿規(guī)格  Berberine   英文名稱Ratgp130ELISAKIT大鼠gp130規(guī)格：96T/48T

140670-84-4Levatin品牌  Levatin   英文名稱RatGlycoprotein96ELISAKit大鼠腫瘤排斥性抗原gp96(gp96)規(guī)格：96T/48T

1405-86-3甘草酸說明書  Glycyrrhizic acid   英文名稱RatGlycoprotein96ELISAKit大鼠排斥性抗原gp96(gp96)規(guī)格：96T/48T

140369-76-2異型南五味子丁素品牌  Heteroclitin D  英文名稱RatGlycogenphosphorylaseMMELISAKit大鼠糖原1酸化酶同工酶MM(GPMM)規(guī)格：96T/48T

140360-29-8灰氈毛忍冬皂苷甲說明書  Macranthoidin A   英文名稱RatGlycogenphosphorylaseMMELISAKit大鼠糖原1酸化酶同工酶MM(GPMM)規(guī)格：96T/48T

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。