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詳細介紹
產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™人腎成纖維細胞試劑盒 |
英文名稱 |
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貨號 | EYX99520 |
PrimaCell™人腎成纖維細胞試劑盒
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。
實驗要點及說明；
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作要點；
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
犬胰蛋白酶(ypsin)試劑盒 Canine ypsin ELISA Kit 18607-90-4卡枯醇說明書 kakoul
英文名稱MouseSerotonin5-HydroxyyptamineELISAKit小鼠5-羥色氨(5-HT)規(guī)格：96T/48T 58-55-9茶堿品牌 Theophylline
差異相減雜交試劑盒10 34271-54-0茶氨酸規(guī)格 Theanine
Ratfreefattyacids,FFAELISA試劑盒大鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 30462-34-1茶黃素-3-沒食子酸酯 Theaflavin-3-Gallate(TF-3-G)
小鼠組蛋白去乙?；?/span>4(HDAC4)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC4 ELISA Kit 28543-07-9茶黃素-3＆#146;-沒食子酸酯說明書 Theaflavin-3＆#146;-Gallate (TF-3＆#146;-G)
83-86-3植酸品牌 Phytic acid 組織HHV6(HUMANHERPESVIRUS6)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20
83-67-0可可堿品牌 Theobromine 組織FGFR1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20
83-49-8豬去氧膽酸 Hyodeoxycholic acid 組織EPHA3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20
83-48-7豆甾醇品牌 Stigmasterol 組織EBV(EPSTEIN-BARR)病毒定性檢測試劑盒20
83-46-5β-谷甾醇說明書 β-Sitosterol 組織D-乳酸比色法定量檢測試劑盒20
Ratglucoprotein130,gp130ELISA試劑盒大鼠糖蛋白130(gp130)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 144506-14-9甘草查爾酮C Licochalcone C
小鼠轉(zhuǎn)錄激活因子3(ATF3)ELISA試劑盒 ，英文名： ATF3 ELISA Kit 1449-05-4甘草酸說明書 Glycyrrhetinic acid
犬促卵泡素(FSH)ELISA檢測試劑盒Caninefollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit 96T/48T 551-15-5甘草苷品牌 Liquiritin
犬胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)試劑盒 Canine thymus activation regulated chemokine,TARC/CCL17 ELISA Kit 578-86-9甘草素規(guī)格 Liquiritigenin
英文名稱HumanHLA-2ELISAKit人組織相容性抗原(HLA-2)規(guī)格：96T/48T 53956-04-0甘草酸單銨鹽 Glycyrrhizic acid ammonium salt
PrimaCell™人腎成纖維細胞試劑盒1453-93-620(R)原人參三醇 20(R)Protopanaxatriol 英文名稱Ratheatshockprotein60ELISAKit大鼠熱休克蛋白60(Hsp60)規(guī)格：96T/48T
14534-61-3異綠原酸B品牌 Isochlorogenic acid B 英文名稱Ratheatshockprotein60ELISAKit大鼠熱休克蛋白60(Hsp60)規(guī)格：96T/48T
1449-05-4甘草酸說明書 Glycyrrhetinic acid 英文名稱RatHeatShockProtein40ELISAKit大鼠熱休克蛋白40(HSP40)規(guī)格：96T/48T
1447-88-7高車前素說明書 Hispidulin 英文名稱RatHeatShockProtein40ELISAKit大鼠熱休克蛋白40(HSP40)規(guī)格：96T/48T
144506-14-9甘草查爾酮C Licochalcone C 英文名稱RatHeatShockProtein20ELISAKit大鼠熱休克蛋白20(HSP20)規(guī)格：96T/48T
運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
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