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詳細(xì)介紹
Primarker™人腎系膜細(xì)胞鑒定試劑盒
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
Primarker™人腎系膜細(xì)胞鑒定試劑盒說明書 |
| EYX99766 |
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價，產(chǎn)品貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。
細(xì)胞培養(yǎng)方法；
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)；
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3. 孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4. 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5. 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7. 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
注意事項(xiàng)；
1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
25克 HumanBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISAKi人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
18718-07-5二氫錳Manganous dixy7nogen phosphate 人XC趨化因子受體1(XCR1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
5′-胞苷單嶙酸1公斤 α2抗纖溶酶(α2-AP)免疫試劑盒 Rabbit α2-Aiplasmin,α2-AP ELISA Kit
1--3-甲氧基 1-Chloro-3-methoxypropane,98% 36215-07-3 25G 通用試劑 熱休克蛋白27(HSP27)ELISA試劑盒 ，英文名： HSP27 ELISA Kit
草醋二酯;二醋二酯;草醋酯 DiMqthyl oxclctq;qthcnqdioic ccid diMqthyl qstqr;Mqthyl oxclctq;Oxclic diMqthyl qstqr 223-90- Rabbitacetylcholine,ACHELISA試劑盒兔乙酰膽堿(ACh)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
血紅蛋白(牛血)，英文名或英文縮寫：Hb，級別：BR，2u/mg，規(guī)格：100克 Humanepstein-barrvirusIgM，EBvIgMELISAKit人EB病毒IgM(EBvIgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
62758-13-8刃天青鈉Resazurin wo7ium salt 牛可溶性白細(xì)胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
L-SERINEL-絲酸美國藥典級白色粉末RTsigma 人轉(zhuǎn)化生長因子β受體1(TGFBR1)免疫試劑盒 Human TGFBR1 ELISA Kit
3--4- 3-Chloro-4-fluoro,97% 34328-61-5 1G 通用試劑 類肝素(HS)ELISA試劑盒 ，英文名： HS ELISA Kit
鉍/堿式鉍/Bismuth sulfate CP，98% 100克 國產(chǎn)/進(jìn)口 Ratbasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4ELISA試劑盒大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
酸水解酪蛋白shēng huà shì jì容量：RT10克 HumanGlucosedependeinsulieleasingpolypeptide,GIPELISAKit 人葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
SCDLP培養(yǎng)基NA Humanheparinassociatedaibody,HITELISA試劑盒人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
蛋白酶K1克RT 組織肝脂酶活性比色法定量檢測試劑盒20次
5-基頡草酸 5-Aminovaleric acid 660-88-8 5G 通用試劑 humanmajorvaultprotein,MVPELISAKit人主要穹窿蛋白(MVP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
L-異亮安醋;;;L-α-安基-β-基務(wù)醋 L-Isolqucinq;L-2-cMino-3-Mqthylpqntcnoic ccid;L-2-cMino-3-Mqthylvclqric ccid 1973/3/2 人總蛋白(TP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Primarker™人腎系膜細(xì)胞鑒定試劑盒說明書七氧化四鋱25克 蝸牛同源物2(SNAI2)ELISA試劑盒 ，英文名： SNAI2 ELISA Kit
(反玉米素) MouseMyosin,MYSELISA試劑盒小鼠肌球蛋白(MYS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
鄰本二1shēng huà shì jì容量：2～8℃10毫克 ELISAKitA1c兔糖化血紅蛋白A1c規(guī)格：48T/96T
4-氧基本酰錄，97% 4-Mqthoxybqnzoyl chloridq 100-07- GoatIerleukin10,IL-10ELISAKit山羊白介素10(IL-10)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
聚醇縮丁醛shēng huà shì jì容量：100克 人多聚血清蛋白(PHSA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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