詳細介紹
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞;WI38/VA13價格準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品描述:
細胞名稱 SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞;WI38/VA13價格
形態(tài)特性上皮細胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性該細胞1964年建系,源自3個月胎齡的女性胚胎的肺成纖維細胞,經(jīng)SV-40轉(zhuǎn)化。
培養(yǎng)條件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
傳代方法1:2~1:10傳代,每周換液2次
傳代情況C2
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體45~89
注意事項:
?1.一般客戶拿到SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞;WI38/VA13價格后,應(yīng)該注意什么?
客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(4)細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(5)細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(6)細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
(7)視具體情況而定。
ANP*小鼠心鈉肽規(guī)格48T/96T
小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4ELISAKit,48T/96T*小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4ELISAKit,48T/96T規(guī)格48T/96T
CT-1*小鼠心肌營養(yǎng)素1規(guī)格48T/96T
cTn-Ⅰ*小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ規(guī)格48T/96T
cTn-Ⅰ*小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ規(guī)格48T/96T
TAFI*小鼠纖溶抑制因子規(guī)格48T/96T
PAI-1*小鼠纖溶酶原激活物抑制因子1規(guī)格48T/96T
PAI*小鼠纖溶酶原激活物抑制因子規(guī)格48T/96T
PAP*小鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物規(guī)格48T/96T
FN*小鼠纖連蛋白規(guī)格48T/96T
SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞;WI38/VA13價格CREB結(jié)合蛋白抗原CBP(CREB-bindingprotein)CREB結(jié)合蛋白抗原0.5mgCBP(CREB-bindingprotein
CBX3/HP1gamma染色盒同源物3抗原CBX3/HP1gamma染色盒同源物3抗原0.5mgCBX3/HP1gamma染色盒同源物3抗原
CBX5(ChromoboxHomolog5)CBX5(多肽)0.5mgCBX5(ChromoboxHomolog5
抗原CC16(Claracellprotein16)peptide克拉拉細胞蛋白(Clara細胞分泌蛋白)抗原0.5mgCC16(Claracellprotein16
CCK8(Cholecystokinin-8)膽囊收縮素/縮膽囊素(八肽)0.5mgCCK8(Cholecystokinin-8
CCL1/TCA3/I-309嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗原CCL1/TCA3/I-309嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗原0.5mgCCL1/TCA3/I-309嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗原
單核細胞趨化蛋白5抗原CCL12/MCP-5(C-Cmotifchemokine12)單核細胞趨化蛋白5抗原0.5mgCCL12/MCP-5(C-Cmotifchemokine12
嗜酸粒細胞趨化蛋白14抗原CCL14/HCC-1(C-Cmotifchemokine14)嗜酸粒細胞趨化蛋白14抗原0.5mgCCL14/HCC-1(C-Cmotifchemokine14
冷凍保存細胞之方法:
SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞;WI38/VA13價格冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。