土壤中性蛋白/酶試劑盒-微量法正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機化合物的轉(zhuǎn)化，其 水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-NPT 在中性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。

測定原理：

中性條件下，S-NPT 可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨/酸；在堿性條件下，酪氨/酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)；在 680nm 有特征吸收峰。

實驗中所需儀器及設(shè)備：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96 孔板、雙蒸水

土壤中性蛋白/酶試劑盒-微量法試劑組成和配置：

試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 6ml 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑 4℃保存； 

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 2mL 試劑七，沸水浴加熱溶解，然后加入 8ml 試劑一，充分混勻備用，用不完的試劑 4℃保存；

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 30ml 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃ 保存；

試劑五：液體 8mL×1 瓶，4℃保存；

試劑六：液體 1.5mL×1 支，0.05mg/ml 標(biāo)準(zhǔn)酪氨/酸溶液，4℃保存； 試劑七：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。

土壤中性蛋白/酶試劑盒-微量法測定操作：

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 680nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定：

混勻后，40℃水浴 30min，振蕩 5-6 次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸

混勻，8000g 25℃離心 10min，取上清液，在EP 管中加入下列試劑

混勻，40℃水浴 20min，8000g 25℃離心 10min，取上清液 200μL，680nm 下讀取各管吸光值 A

注意：標(biāo)準(zhǔn)管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對照管。

土壤中性蛋白/酶試劑盒-微量法活性計算：

單位定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 酪氨/酸為一個 S-NPT 活力單位。

S-NPT(mg/d/g 土樣)=C 標(biāo)準(zhǔn)×(A 測定管-A 對照管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 反總÷W÷T=24×(A 測定管-A 對照管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.05mg/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.4mL；T：反應(yīng)時間，

30min=1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.02g。