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規(guī)格	50T/100T	儀器	分光光光度計(jì)/酶標(biāo)儀
運(yùn)輸	常溫	保質(zhì)期	三個(gè)月
品牌	合肥萊爾生物科技有限公司	訂購(gòu)方式	聯(lián)系客服
保存	按說明書	貨期	現(xiàn)貨

土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）檢測(cè)試劑盒說明書，注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

土壤亞硝酸還原酶是反硝化作用中的關(guān)鍵酶之一，參與亞硝酸鹽至 NO 的還原反應(yīng)，它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉(zhuǎn)化效率，為氮素轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究提供一定的依據(jù)。

測(cè)定原理：

亞硝酸還原酶可將 NO2—還原為 NO，使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的 NO2—減少，即 540nm 處吸光值的變化可反應(yīng)土壤中亞硝酸還原酶的活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、水浴鍋、低溫離心機(jī)。

土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）檢測(cè)試劑盒試劑的組成和配制：

試劑一：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 4mL 蒸餾水溶解。

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。（如出現(xiàn)沉淀可以 70-80℃加熱溶解）

試劑四：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。（如出現(xiàn)沉淀可以 70-80℃加熱溶解）試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑四和試劑五以 1:1 的比例混合。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。

測(cè)定操作表：

	空白管	對(duì)照管	測(cè)定管
風(fēng)干土樣（g）		0.02	0.02
蒸餾水（μ L）		40
試劑一（μ L）	40		40
試劑二（μ L）	40	40	40
混勻后，25℃反應(yīng) 1h
試劑三（μ L）	40	40	40
充分震蕩 30S，10000rpm，4℃，離心 10min
上清液（μ L）	70	70	70
工作液（μ L）	140	140	140
充分混勻，測(cè)定 540nm 各管吸光值，分別記為 A 空白管、A 對(duì)照管、A 測(cè)定管。空白管只要做一管，每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì) 照管。

土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）檢測(cè)試劑盒計(jì)算公式：
a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.5562x+ 0.0088，R2 = 0.996；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μ mol/mL），y 為吸光值（A標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）。
酶活單位定義：每g 土樣每天還原 1μ mol NO2ˉ 的量為一個(gè)酶活力單位。
S-NiR（μ mol /d /g 土樣）=[A 空白管-(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管) -0.0088]÷1.5562×V 標(biāo)÷W÷T
= 0.617×[A 空白管-(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管) -0.0088]÷W
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V 標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.04mL；W：樣本質(zhì)量，g。
b. 使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.7781x+ 0.0088，R2 = 0.996；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μ mol/mL），y 為吸光值（A標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）。
酶活單位定義：每g 土樣每天還原 1μ mol NO2ˉ 的量為一個(gè)酶活力單位。
S-NiR（μ mol /d /g 土樣）=[A 空白管-(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管) -0.0088]÷0.7781×V 標(biāo)÷W÷T
= 1.234×[A 空白管-(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管) -0.0088]÷W
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V 標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.04mL； W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
1. 配制好的工作液 3 天內(nèi)使用完。
2. 若吸光值超過 1.5，將上清液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤偌尤牍ぷ饕猴@色，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3. 嚴(yán)格控制顯色時(shí)間，否則會(huì)對(duì)結(jié)果有影響。
4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為 0.03μ mol/mL-1.5μ mol/mL。
土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）檢測(cè)試劑盒A 空白管-（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）線性范圍為 0.02-1.5。