土壤酸性磷酸酶（S-ACP）檢測試劑盒

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 顯著影響，根據(jù)最適 pH 范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。

測定原理：

酸性環(huán)境中，S-ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過測定酚的生成量即可計算出S-ACP 活性。

自備實驗用品及儀器：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前加 100mL 蒸餾水充分溶解。試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 576 μ  L 無水乙醇（自備），24 μ  L 蒸餾水充分溶解。（變褐色后不能再使用）

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，0.5μ mol/mL 苯酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

土壤酸性磷酸酶（S-ACP）檢測試劑盒粗酶液提取：

稱取風(fēng)干混勻土壤約 0.1g，加入 50μ  L 甲苯（自備），輕搖 15min；加 0.4 mL 試劑一并且搖勻后，置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱，開始計時，催化反應(yīng) 24h；到時后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應(yīng)。8000g，25℃離心 10min，取上清液置于冰上待測。

測定步驟：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板，加入 10μ L 蒸餾水，20μ L 試劑三，4μ L 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166μ L，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板，加入 10μ L 標(biāo)準(zhǔn)液，20μ L 試劑三，4μ L 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166μ L，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測定管：取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板，加入 10μ L 上清液，20μ L 試劑三，4μ L 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166μ L，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 測定管。

土壤酸性磷酸酶（S-ACP）檢測試劑盒注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

S-ACP 活性計算公式：

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放 1μ mol 酚為 1 個酶活單位。

S-ACP（μ mol/d /g 土樣）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總

÷W÷T ÷1000

=0.725×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5 μ mol/mL； V 總：催化體系總體積，1.45mL；W：土壤樣品質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時間，24h=1 d。土壤酸性磷酸酶（S-ACP）檢測試劑盒