近十年來流式細胞儀已經成為臨床醫生、免疫學家和細胞生物學家*的工具，這項技術在不斷進步。流式細胞儀的多參數細胞分析這一*的功能讓大多數細胞分析成為了可能。Coon首先提出了熒光抗體標記細胞內的目的蛋白技術，在20世紀80年代，細胞亞群僅僅通過檢測單一的細胞表面標志物來確定，使用的單抗和熒光素很受限制。基因表達技術的誕生和新的單抗以及熒光素的獲得使更復雜的多參數分析成為可能。

1. 常用熒光素的種類及特性

1）. FITC（Fluorescein）又稱異硫氰酸熒光素，其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀；FITC 的大發射波長為525nm，在流式細胞儀的FL1通道檢測。

2). PE（R-Phycoerythrin）又稱藻紅蛋白，有R-PE和RD1的別稱，其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀；PE 的大發射波長為575nm，在流式細胞儀的FL2通道檢測。

3). PE-TR（PE-TexasRed）/ECDPE-TR又名ECD，是由PE和TexasRed（TR）組合而成的Tandem熒光素；其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀；PE-TR的大發射波長為 615nm，在流式細胞儀的FL3通道檢測；PE-TR標記的抗體可用于毫瓦級激光器的小流式細胞儀，也適用于配備有全功率激光器的大流式分選儀。

4). PI（PropidiumIodide）又稱碘化丙啶，其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀；PI的大發射波長為617nm。在流式細胞儀的FL3通道檢測。

5). PE-Cy5（TRI-COLOR，TC）又稱TRI-COLOR或TC，是由PE和Cy5組合而成的Tandem熒光素；其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀；PE-Cy5 的大發射波長為670nm，在流式細胞儀上用FL3通道檢測；PE-Cy5 標記的抗體可用于毫瓦級激光器的小流式細胞儀，也適用于配備有全功率激光器的大流式分選儀。

6). PerCP（Peridinin-Chlorophyll-ProteinComplex）多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質復合物，其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀；PerCP的大發射波長為677nm。在流式細胞儀的FL3通道檢測。

7). APC（Allophycocyanin）又稱別藻藍蛋白，其標記的抗體適用于配備氦氖激光器發射波長為633nm的多色流式細胞儀；APC大發射波長為660nm，在流式細胞儀中只有配有雙激光器的FL4才能檢測。

8). APC-Cy7是由APC 和Cy7組合而成的Tandem熒光素；其標記的抗體適用于配備氦氖激光器發射波長為633nm的多色流式細胞儀，APC-Cy7主要用于四色以上的流式細胞術。

2. 常見熒光素熒光強度比較

熒光的強度與染色指數(Stain Index)有關，染色指數的計算：Stain Index=D/W，染色指數越高，熒光強度越好；染色指數較低，染色強度相對較差：

3. 多色流式細胞檢測中熒光素選擇的原則

根據機器配置選擇熒光素

比如 BD calibour 流式儀，配置有兩色激光，能夠做 4 個通道的熒光素，需根據對應的激光激發波長和檢測通道選擇合適的熒光抗體

多色標記熒光素搭配原則：每個通道只能選擇一種熒光素；各個通道之間的熒光素可以隨意搭配。FACSCalibur 常用的四色搭配：FITC, PE, PerCP, APC