細胞三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒技術資料

　　產品說明書(中文版)

　　主要用途

　　細胞三磷酸腺苷酶(ATP酶)活性染色試劑是一種旨在使用鈣激活技術，在堿性條件下，由三磷酸腺苷酶催化水解產生的磷酸與鈣離子結合，經過氯化鈷的替換，zui后在硫化銨存在的情況下，呈現細胞樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現象的而經典的技術方法。該技術經過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于各種動物和人體細胞ATP酶的活性檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，靈敏牢固，顯色清晰。

　　三磷酸腺苷酶或ATP酶(adenosinetriphosphatase;ATPase)可催化ATP水解生成ADP及無機磷的反應，這一反應放出大量能量，用于運送離子進出細胞，同時供給生物體進行需能生命過程。它存在于生物細胞的多個部位，比如細胞質膜上和葉綠體類囊體膜上等，對整個生命的維持有著重要的作用。膜結合ATP酶存在多種形式：鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶(plasma membrane calcium ATPase;PMCA)或肌質網/內質網鈣泵ATP酶(sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases;SERCA)、氫鉀ATP酶(hydrogen/potassium ATPase)或胃質子泵(gastric proton pump)等。

　　產品內容

　　堿性液(Reagent A)毫升

　　反應液(Reagent B)毫升

　　激活液(Reagent C)毫升

　　置換液(Reagent D)毫升

　　清理液(Reagent E)毫升

　　顯色液(Reagent F)毫升

　　產品說明書 1份

　　保存方式

　　保存反應液(Reagent B)在-20℃冰箱里，避免反復凍融，避免光照;其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

　　用戶自備

　　蘇木素復染試劑盒：用于常規染色后復染

　　培養箱：用于反應孵育

　　光學顯微鏡：用于染色后觀察分析

　　實驗步驟

　　實驗開始前，將試劑盒里的反應液(Reagent B)從-20℃的冰箱里取出，放進冰槽里融化，避免光照。然后進行下列操作：

　　操作一、25cm2細胞培養瓶染色

　　樣本激活處理

　　小心抽去25cm2細胞培養瓶里的培養液

　　小心加入xx毫升堿性液(Reagent A)鋪滿整個樣品表面

　　小心抽去堿性液(Reagent A)

　　小心加入x毫升反應液(Reagent B)，鋪滿整個樣品表面

　　放進37℃培養箱里，孵育30分鐘

　　小心抽去反應液(Reagent B)

　　小心加入xx毫升激活液(Reagent C)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去 激活液(Reagent C)

　　重復實驗步驟7至9二次

　　二、樣本染色處理

　　小心加入xx毫升置換液(Reagent D)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去置換液(Reagent D)

　　小心加入xx毫升清理液(Reagent E)

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　小心加入xx毫升顯色液(Reagent F)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育30至60秒;或直至可見棕黑色

　　小心抽去顯色液(Reagent F)

　　小心加入xx毫升清理液(Reagent E)

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　(選擇步驟)樣本復染處理

　　樣本復染處理(蘇木素)

　　即刻在一般光學顯微鏡下觀察：酶活性陽性部位呈現深淺不一的棕黑色(如果復染，則細胞核為藍色)

　　操作二、24孔細胞培養板染色

　　樣本激活處理

　　小心抽去24孔細胞培養板里的培養液

　　小心加入xx微升堿性液(Reagent A)，鋪滿整個樣品表面

　　小心抽去堿性液(Reagent A)

　　小心加入xx微升反應液(Reagent B)，鋪滿整個樣品表面

　　放進37℃培養箱里，孵育30分鐘

　　小心抽去反應液(Reagent B)

　　小心加入xx微升激活液(Reagent C)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去激活液(Reagent C)

　　重復實驗步驟7至9二次

　　二、樣本染色處理

　　小心加入xx微升置換液(Reagent D)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去置換液(Reagent D)

　　小心加入xx微升清理液(Reagent E)

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　小心加入xx微升顯色液(Reagent F)，鋪滿整個樣品表面

　　室溫下孵育30至60秒;或直至可見棕黑色

　　小心抽去顯色液(Reagent F)

　　小心加入xx微升清理液(Reagent E)

　　室溫下孵育2分鐘

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　(選擇步驟)樣本復染處理

　　樣本復染處理(蘇木素)

　　即刻在一般光學顯微鏡下觀察：酶活性陽性部位呈現深淺不一的棕黑色(如果復染，則細胞核為藍色)

　　注意事項

　　本產品為50次(2個24孔板)或10次(10個25cm2細胞培養瓶)操作

　　操作時，須帶手套

　　每次更換試劑溶液時，須抽干殘留液體

　　整個操作，在避光狀態下進行

　　細胞染色注意不要過度

　　避免使用有機溶劑(乙醇、二甲苯等)脫水、澄清處理

　　細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察

　　本產品適合各種規格的培養細胞：載玻片，載玻片培養皿，35mm培養皿，和各種培養孔板，須相應調整試劑溶液：

　　操作容器建議試劑溶液規格

　　載玻片100微升

　　載玻片培養皿1毫升

　　35mm培養皿1毫升

　　96孔培養板100微升

　　48孔培養板200微升

　　24孔培養板500微升

　　12孔培養板1毫升

　　6孔培養板2毫升

　　25cm2細胞培養瓶3毫升

　　ELISA試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。古朵試劑盒