美國NovaBios Yellow fever virus IgM(YFV-IgM)ELISA Kit

廣州健侖生物科技有限公司

本公司專業(yè)供應(yīng)各種進(jìn)口品牌黃熱病檢測(cè)試劑盒，包括美國的NovaBios、廣州創(chuàng)侖等CDC品牌。主要包括膠體金、酶免、PCR等方法學(xué)。歡迎咨詢

黃熱病毒IgM檢測(cè)試劑

黃熱病毒IgG檢測(cè)試劑

黃熱病ELISA檢測(cè)試劑

黃熱病快速檢測(cè)試劑

黃熱病毒核酸檢測(cè)試劑盒（熒光探針PCR）

美國CDC的黃熱病毒診斷試劑——美國的NovaBios

美國NovaBios Yellow fever virus IgM(YFV-IgM)ELISA Kit

【黃熱病簡(jiǎn)介】
黃熱病，歷*稱為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數(shù)情況下，癥狀包括發(fā)熱，寒戰(zhàn)，食欲不振，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內(nèi)改善。在一些人在一天內(nèi)改善，發(fā)燒回來，腹痛發(fā)生，肝損傷開始導(dǎo)致黃色皮膚。如果發(fā)生這種情況，出血和腎臟問題的風(fēng)險(xiǎn)也增加。

【檢測(cè)原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特異性抗原。將對(duì)照或測(cè)試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測(cè)試劑加入到孔中。TMB底物用于顯現(xiàn)HRP酶反應(yīng)。TMB由HRP催化以產(chǎn)生在加入酸性停止溶液后變?yōu)辄S色的藍(lán)色產(chǎn)物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM/IgG量成比例。外徑在微板讀數(shù)器中在450nm下通過分光亮度計(jì)測(cè)量吸亮度，然后可以計(jì)算YFV-IgM/IgG的濃度。

產(chǎn)品規(guī)格：96T/盒
檢測(cè)范圍：定性
靈敏度：定性
儲(chǔ)存和使用期：2-8℃ 儲(chǔ)存12個(gè)月
產(chǎn)品應(yīng)用：用于定性檢測(cè)人血清，血漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

【套件組件】
1.一個(gè)96孔板預(yù)涂
2.陽性對(duì)照：0.5ml
3.陰性對(duì)照：0.5ml
4.洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋：1:30
5.樣品稀釋緩沖液：6ml
6.6HRP酶聯(lián)試劑（RTU）：6ml
7.終止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培養(yǎng)箱
2.酶標(biāo)儀（波長：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動(dòng)洗板機(jī)
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。

【操作程序】
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測(cè)試樣品（2小時(shí)內(nèi)）后立即分離。或等分并長期儲(chǔ)存在-20°C。避免多個(gè)凍融循環(huán)。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲(chǔ)存于-20℃。
血清：在室溫下凝結(jié)血清（約4小時(shí)）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲(chǔ)存在-20°C。
血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內(nèi)以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲(chǔ)在-20°C冷凍。
尿：在無菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲(chǔ)在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據(jù)組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對(duì)細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測(cè)定或等分并儲(chǔ)存在-80℃。
（注意：1.*凝結(jié)血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作試驗(yàn)樣品防腐劑，因?yàn)樗种艸RP。）

2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測(cè)定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個(gè)測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.在預(yù)涂板上分別設(shè)置陽性/陰性，測(cè)試樣品和對(duì)照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽性對(duì)照等分到設(shè)定的孔中。
3.向?qū)φ眨悖┛字屑尤?0μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測(cè)試樣品孔中加入50μl適當(dāng)稀釋的樣品（樣品稀釋比例：1：5）。在底部加入溶液而不接觸側(cè)壁。搖動(dòng)平板以混合內(nèi)容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內(nèi)容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時(shí)候*干燥。
手動(dòng)清洗：丟棄溶液，不要接觸側(cè)壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個(gè)孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內(nèi)容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動(dòng)洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過量填滿孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉(zhuǎn)該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設(shè)置為1分鐘的浸泡時(shí)間。
8.向每個(gè)孔中加入50μlHRP結(jié)合物的試劑（對(duì)照孔除外）。在每個(gè)孔底部加入溶液，不要接觸側(cè)壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個(gè)孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個(gè)孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應(yīng)立即變?yōu)辄S色。
13.閱讀O.D.在微板讀數(shù)器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內(nèi)。對(duì)于計(jì)算，（相對(duì)O.D.450）=（每個(gè)孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以作為每種標(biāo)準(zhǔn)溶液（Y）的相對(duì)O.D.450與標(biāo)準(zhǔn)溶液（X）的相應(yīng)濃度作圖。可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數(shù)乘以內(nèi)插法得到稀釋前的濃度。

C.結(jié)果確定
1.試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照的平均值≥1.00; 陰性對(duì)照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=負(fù)控制的平均值+0.15
3.陰性結(jié)果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽性結(jié)果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項(xiàng)
1.在實(shí)驗(yàn)之前，離心每個(gè)試劑盒組分?jǐn)?shù)分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時(shí)避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結(jié)晶并分離。如果發(fā)生這種情況，請(qǐng)加熱管以溶解。
4.建議每個(gè)對(duì)照和樣品一式兩份或重復(fù)測(cè)量三次。
5.不要讓板在任何時(shí)候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復(fù)使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲(chǔ)存在黑暗中，并且為了避免板溫育對(duì)于溫度差的邊緣效應(yīng)，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

美國NovaBios Yellow fever virus IgM(YFV-IgM)ELISA Kit

實(shí)驗(yàn)室及其他檢查
1.一般常規(guī)和生化檢查
外周血白細(xì)胞總數(shù)正常或升高，但在本病早期中性粒細(xì)胞數(shù)常減少。血小板計(jì)數(shù)正常或減少。血清膽紅素、ALT和AST升高，死亡病例更為明顯。有黃疸的病例凝血酶原時(shí)間及部分凝血活酶時(shí)間延長。尿蛋白增多、血清尿素及肌酐升高。
2.病毒分離
采取病初3～4天內(nèi)血標(biāo)本接種小白鼠腦內(nèi)或細(xì)胞培養(yǎng)可分離出病毒并用血清學(xué)方法進(jìn)行鑒定。
3.血清學(xué)檢查
可作血凝抑制試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)或中和試驗(yàn)檢測(cè)特異性抗體，急性期與恢復(fù)期雙份血清標(biāo)本4倍以上增高可以診斷本病。目前多采用抗體捕獲酶免疫試驗(yàn)檢測(cè)黃熱病病毒IgM抗體，在感染后一周即呈陽性，有助于早期診斷，早期亦可用抗原捕獲試驗(yàn)檢測(cè)病毒抗原。
4.反轉(zhuǎn)錄/聚合酶鏈反應(yīng)（RT/PCR）
檢測(cè)黃熱病毒RNA有很強(qiáng)的特異性。有報(bào)告血清中病毒RNA較活病毒更為穩(wěn)定，在27℃常溫下能保存相當(dāng)長時(shí)間，優(yōu)于病毒分離法。
5.其他輔助檢查
心電圖可見PR及QT間期延長及ST-T波異常。
診斷
對(duì)于典型病例黃熱病的診斷不難，而對(duì)于散發(fā)的、早期或輕型病例不易確診，需借助于實(shí)驗(yàn)室檢查。
鑒別診斷
在黃熱病的診斷過程中應(yīng)注意：與流行性出血熱、鉤端螺旋體病、登革熱、病毒性肝炎、惡性瘧疾及藥物中毒性肝炎等進(jìn)行鑒別。
治療
至今尚無*療法。
1.一般治療
黃熱病的治療應(yīng)臥床休息直至*恢復(fù)，應(yīng)住在無蚊蟲的屋內(nèi)，尤其在病兒發(fā)熱期間黃熱病毒血癥應(yīng)使用蚊帳。給予流質(zhì)或半流質(zhì)飲食，頻繁嘔吐者可禁食、給予靜脈補(bǔ)液，注意水、電解質(zhì)和酸堿平衡。
2.對(duì)癥治療
高熱時(shí)黃熱病的治療宜采用物理降溫為主，禁用阿司匹林退熱，因可誘發(fā)或加重出血。頻繁嘔吐可口服或肌注胃復(fù)安。有繼發(fā)細(xì)菌感染或并發(fā)瘧疾者給予合適的抗生素或抗瘧藥。心肌損害者可試用腎上腺皮質(zhì)激素。對(duì)重癥病例應(yīng)嚴(yán)密觀察病情變化，如發(fā)生休克、急性腎功能衰竭，消化道出血等即予以相應(yīng)處理。

美國NovaBios Yellow fever virus IgM(YFV-IgM)ELISA Kit

我司還提供其它進(jìn)口或國產(chǎn)試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團(tuán)菌等試劑盒以及日本生研細(xì)菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產(chǎn)品。

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Laboratory and other inspections
1. General routine and biochemical tests
Peripheral white blood cells in the normal or elevated, but in early childhood the number of neutrophils often reduced. Plaet counts are normal or reduced. Serum bilirubin, ALT and AST increased, more serious cases of death. The time of prothrombin time and partial thromboplastin prolongation in patients with jaundice. Increased urinary protein, serum urea and creatinine increased.
2. virus isolation
To take the first 3 to 4 days of the disease blood samples inoculated with the mouse brain or cell culture can be isolated from the virus and serological methods for identification.
3. serological examination
Can be used for hemagglutination inhibition test, complement test or neutralization test to detect specific antibodies, acute phase and convalescence double serum samples more than 4 times higher can diagnose the disease. At present, the anti-virus immunoassay test is used to detect the yellow fever virus IgM antibody, which is positive once a week after infection, which is helpful for early diagnosis. Antigen capture test can also be used to detect virus antigens.
4. Reverse transcription / polymerase chain reaction (RT / PCR)
Detection of yellow fever virus RNA has a strong specificity. It has been reported that viral RNA in serum is more stable than live virus and can be stored at 27 ℃ for a long time at room temperature, which is superior to virus isolation method.
5. Other auxiliary checks
ECG can be seen PR and QT interval extension and ST-T wave anomalies.
diagnosis
For the diagnosis of typical cases of yellow fever is not difficult, and for the distribution of early or light cases are not easy to diagnose, need to rely on laboratory tests.
Differential diagnosis
In the diagnosis of yellow fever should pay attention to: and epidemic hemorrhagic fever, leptospirosis, dengue fever, viral hepatitis, falciparum malaria and drug toxicity of hepatitis and other identification.
treatment
There is no special therapy yet.
General treatment
Treatment of yellow fever should be rested until fully restored, should live in the house without mosquitoes, especially in the sick children during the fever of yellow fever should use mosquito nets. Given fluid or semi-liquid diet, frequent vomiting can be fasting, given intravenous fluid, pay attention to water, electrolyte and acid-base balance.
2. symptomatic treatment
High fever when the treatment of yellow fever should be the main use of physical cooling, disabling aspirin fever, can induce or increase bleeding. Frequent vomiting can be given orally or intramuscularly. Secondary antibiotics or antimalarials are given to secondary bacterial infections or malaria. Myocardial damage can try adrenal cortex hormones. For severe cases should be closely observed changes in the condition, such as shock, acute renal failure, gastrointestinal bleeding, etc. should be dealt with accordingly.