人胚肺成纖維細胞MRC-5細胞  凍存與復蘇

為了防止因污染或技術原因使長期培養功虧一簣，考慮到培養細胞因傳代而遲早會出現變異，有時因寄贈、交換和購買，培養細胞從一個實驗室轉運到另一個實驗室，*的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊細胞株的遺傳特性極為重要。現簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時，細胞內的酶活性均己停止，即代謝處于*停止狀態，故可以長期保存。細胞低溫保存的關鍵，在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內，水晶呈針狀，極易招致細胞的嚴重損傷。
一、細胞的凍存:為避免污染造成的損失，zui小化連續細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應該特性化并檢查是否污染。
有幾種普通培養基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養基，成分可能如下：

人胚肺成纖維細胞MRC-5細胞  凍存與復蘇

人胚肺成纖維細胞MRC-5  
人胚肺成纖維細胞CCC-HPF-1  
人胚胎氣管組織來源細胞CCC-HBE-2  
人胚胎肺成纖維細胞WI-38  
SV-40Z轉化肺成纖維細胞WI38/VA13  
人胚肺二倍體細胞2BS  
人胚肺二倍體細胞KMB-17  
人肺細胞HLF-a  
人小細胞肺癌細胞DMS 153  
人胚肺細胞 VA13細胞WI-38 VA13亞系 2RA  
人胚肺二倍體細胞HEL-1  
人胚肺細胞系KuMA  
人肺轉化細胞系AE1201    
人肺鱗癌細胞NCI-H226  
人胚肺二倍體細胞HEL-2  
人支氣管上皮樣細胞BEAS-2B  
人胚肺轉化細胞SL-1  
人肺腺癌細胞Calu-3  
人小細胞肺癌細胞NCI-H209  
人低分化肺腺癌細胞GLC-82  
人小細胞肺癌細胞NCI-H446  
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H157  
人肺鱗癌細胞NCI-H520  

人胚肺成纖維細胞MRC-5細胞  凍存與復蘇
人肺巨細胞癌高轉移細胞株PG-BE1  
人肺巨細胞癌低轉移細胞株PG-LH7  
人肺癌細胞A-427  
人低分化肺腺癌細胞SK-LU-1  
人肺支氣管癌細胞NCI-H1650  
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H1975  
人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H2087  
人小細胞肺癌細胞NCI-H2227  
人非小細胞肺癌細胞NCI-H23  
人肺腺鱗癌細胞NCI-H596  

◆包含10%甘油的*培養基，
◆包含10%二甲基亞砜(DMSO)的*培養基，
◆50% 細胞條件培養基和50%含有10%甘油的新鮮培養基，或
◆50% 細胞條件培養基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養基。
對于無血清培養基，一些普通的培養基成分可能是：
◆50% 細胞條件無血清培養基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養基，或
◆包含有7.5%二甲基亞砜和10%細胞培養級BSA的新鮮無血清培養基。
1.懸浮細胞
●計數將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數生長期。以大約200～400g離心5分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到zui小體積，不要攪亂細胞。
●以1×107到5×107細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養基中再次懸浮細胞，或者以0.5×107到1×107在無血清培養基中，再次懸浮細胞。
●分裝進凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中，5分鐘內開始冷凍步驟。
●細胞以1℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后轉移到液氮中貯存。
2.貼壁細胞
●使用分離試劑從基層分離細胞，分離時盡可能溫和，使對細胞的損傷減少到zui小。
●在*生長培養基中，再次懸浮分離細胞，確定有活力細胞數。
●以大約200g離心5分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到zui小體積，不要攪亂細胞。
●以5×106到1×106細胞/ml密度，在凍存液中懸浮細胞。
●分裝進凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中，5分鐘內開始冷凍步驟。
●細胞以1℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后轉移到液氮中貯存。