酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題

2013年07月29日 21:17通派（上海）生物科技有限公司點(diǎn)擊量：1798

BD培養(yǎng)基酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題

1.如果誘餌蛋白對(duì)酵母細(xì)胞是有毒的，該怎么辦？

在某些情況下，在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)不好的菌珠可以在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)得很好。首先重懸克隆于1ml的SD/–Trp，接著將重懸液平鋪于5 個(gè)100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下溫浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每塊板上的克隆，并收集到一管中，這樣就可以使用這個(gè)細(xì)胞重懸液進(jìn)行正常的雜交反應(yīng)。

BD培養(yǎng)基酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題2.如果誘餌蛋白能直接激活報(bào)告基因的表達(dá)，該如何處理？

該蛋白很可能有轉(zhuǎn)錄激活域，是個(gè)轉(zhuǎn)錄因子。可以通過(guò)基因重組切掉轉(zhuǎn)錄激活域，然后重新檢測(cè)其是否自激活，但要注意重組也有可能破壞蛋白之間的互作。

BD培養(yǎng)基酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題3.轉(zhuǎn)化效率太低怎么辦？

可以采用以下方法解決：

1）檢測(cè)一下DNA的純度，如果可以的話，重新用乙醇純化。

2） DNA-BD/誘餌蛋白很可能是有毒的。

3）不適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，重新配制培養(yǎng)基，并做對(duì)照轉(zhuǎn)化。

4）檢測(cè)pGBT9對(duì)照載體的轉(zhuǎn)化效率，放置于SD/–Trp平板上，轉(zhuǎn)化效率應(yīng)該在1 x 105 colonies/mg DNA以上。

4.雜交效率不高，該如何處理？

在雜交中，預(yù)轉(zhuǎn)化的誘餌細(xì)胞的數(shù)量可能不夠。當(dāng)對(duì)誘餌菌株進(jìn)行液體培養(yǎng)過(guò)夜時(shí)，應(yīng)挑選大的、新鮮的克隆進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)離心和重懸后，再使用血球計(jì)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。密度應(yīng)該在1 x 109/ml。

一個(gè)甚至兩個(gè)融合蛋白對(duì)酵母細(xì)胞有毒。你可以通過(guò)重組方法來(lái)減輕毒性，同時(shí)又能保證蛋白的相互作用。或者使用表達(dá)水平較低的載體。也可以在瓊脂平板或?yàn)V膜上進(jìn)行雜交。但同時(shí)必須作雜交對(duì)照實(shí)驗(yàn)

上一篇：汽蝕邊界值的確定

下一篇：電線電纜結(jié)構(gòu)和使用范圍

版權(quán)與免責(zé)聲明： 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：智慧城市網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-智慧城市網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：智慧城市網(wǎng)www.3121000.com”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。

本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來(lái)源（非智慧城市網(wǎng)www.3121000.com）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。

免費(fèi)注冊(cè)后，你可以
了解安防行業(yè)更多資訊查看安防行業(yè)供求信息凸顯安防行業(yè)自身價(jià)值馬上注冊(cè)會(huì)員
想快速被買家找到嗎
只需要發(fā)布一條商機(jī)，被買家找到的機(jī)會(huì)高達(dá)90%！還等什么？馬上發(fā)布信息

編輯精選

江蘇泰州車位引導(dǎo)解決方案、停車誘導(dǎo)系統(tǒng)、

在長(zhǎng)三角北翼樞紐城市泰州，一場(chǎng)圍繞“停車難“的系統(tǒng)性治理正悄然改變著城市交通
山東淄博人臉識(shí)別門禁系統(tǒng)、人行通道擺閘/

在智慧城市建設(shè)的浪潮中，山東淄博憑借其深厚的制造業(yè)基礎(chǔ)和持續(xù)的技術(shù)創(chuàng)新，逐漸
從便利到必需：物聯(lián)網(wǎng)如何重新定義家居安全

在本文中，我將解釋物聯(lián)網(wǎng)如何重新定義家庭安全，特別是在廚房中，以及為什么現(xiàn)在
黑龍江綏化車位引導(dǎo)解決方案、停車誘導(dǎo)系統(tǒng)

在城市化進(jìn)程不斷加速的背景下，黑龍江綏化正通過(guò)智能化手段重構(gòu)城市靜態(tài)交通格局
江西上饒人臉識(shí)別門禁系統(tǒng)、人行通道擺閘/

近年來(lái)，隨著智慧城市建設(shè)的推進(jìn)，江西上饒?jiān)诠舶踩c智能化管理領(lǐng)域持續(xù)深耕，
水質(zhì)氨氮監(jiān)測(cè)全維度解析

智易時(shí)代ZW-NH3-N1006氨氮傳感器使用離子選擇性電極，有一種特定類型離子滲透的膜
森林火險(xiǎn)監(jiān)測(cè)站-一款售后靠得住的森林防火

森林火災(zāi)是森林生態(tài)系統(tǒng)的大敵，它能在很短時(shí)間內(nèi)，燒毀大面積的森林和大量的林副
激光雪深監(jiān)測(cè)站廠家哪家好@2025風(fēng)途科技已

我司XS3型激光雪深監(jiān)測(cè)站，采用激光對(duì)雪的識(shí)別與測(cè)量技術(shù)，克服超聲波，電磁波，

本站精選

智慧城市網(wǎng)2025年清明節(jié)放假通知

人間芳菲四月始春歸清明雨時(shí)節(jié)
地方工信快報(bào)來(lái)了｜南京、廣西、上海......

作為與智慧城市行業(yè)息息相關(guān)的行業(yè)，工信領(lǐng)域近期有哪些新動(dòng)向，城市發(fā)展有哪些動(dòng)
交通領(lǐng)域動(dòng)態(tài)速覽｜《普通干線公路資產(chǎn)數(shù)字

在2025年3月25日-3月31日這段時(shí)間里，交通領(lǐng)域發(fā)生了哪些新動(dòng)態(tài)？小編一文帶你揭
智慧城市一周熱點(diǎn)回顧｜工信部等三部門印發(fā)

2025年3月24日-3月30日，智慧城市領(lǐng)域有哪些動(dòng)態(tài)變化發(fā)生？一起來(lái)看看！
地方工信快報(bào)來(lái)了｜上海、福建、重慶......

科技進(jìn)步在重塑著我們的日常。最近，城市發(fā)展有哪些動(dòng)態(tài)呢？小編在本文中做了整理
交通領(lǐng)域動(dòng)態(tài)速覽｜山東臨淄3輛無(wú)人快遞車

小編在本文中對(duì)交通領(lǐng)域最近資訊做了整理，一起來(lái)看！
智慧城市一周熱點(diǎn)回顧｜我國(guó)首個(gè)數(shù)據(jù)標(biāo)注產(chǎn)

2025年3月17日-3月23日，智慧城市領(lǐng)域有哪些動(dòng)態(tài)變化發(fā)生？一起來(lái)看看！
地方工信快報(bào)來(lái)了｜四川、上海、湖北......

智慧城市提升資源利用效率，改善居民生活質(zhì)量的城市發(fā)展模式。作為與智慧城市行業(yè)