2025年04月01日 08:27通派（上海）生物科技有限公司點擊量：18
細胞：Colon26細胞
中文名稱：小鼠結腸癌細胞
生長特性：貼壁細胞
培養基：1640 培養基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）
凍存條件：50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程（ 請嚴格遵照無菌操作）
1． 吸出原培養瓶中的培養基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通常控制在 1-2min）
2． 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰_酶，加 6~8ml 培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
3． 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養。
4． 注意培養基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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細胞進行蛋白質生產的質量控制對細胞的生存是非常重要的，在內質網中分子伴侶calnexin/calreticulin循環保證只有正確折疊的糖蛋白才能到達它們的目的地。
而錯誤折疊的糖蛋白則通過內質網的蛋白質降解途徑(ERAD-ER-associated degradation)進行降解。ERAD使蛋白質被逆向定位到細胞質中，再被蛋白酶解體進行降解。
以前發現一個跨膜的缺失甘露糖苷酶活性的alpha類甘露糖苷酶I型蛋白-EDEM(a transmembrane-mannosidase-I-like protein that lacks mannosidase activity)能夠加速ERAD的活性。
N鏈接多糖Glc1Man9GlcNAc2的糖蛋白能夠與calnexin或calreticulin進行結合，由這兩個分子伴侶來促進它們的折疊，如果加入葡萄糖則能夠干擾這個過程。
但當折疊沒有完_全的時候，游離的糖蛋白或者由糖基轉移酶繼續糖基化然后由分子伴侶促進折疊，或者被內質網的alpha甘露糖苷酶I作用產生Man8GlcNAc2而將糖蛋白導向ERAD的降解途徑。
Nagata and colleagues在第一篇文章中發現EDEM與跨膜的分子伴侶calnexin作用，而不與可溶性的分子伴侶calreticulin，而且calnexin的跨膜區對它們的相互作用是必需的。
研究者用ERAD途徑降解的底物之一NHK(an α1-antitrypsin variant)分析發現，EDEM和NHK與calnexin的結合和底物從calnexin上的釋放對于EDEM介導的ERAD途徑是必需的。而且EDEM可以通過促進底物從calnexin的釋放來加速ERAD途徑。
發現過表達EDEM的水平不僅僅加速了膜結合的ERAD底物降解，也加速了可溶性的ERAD底物降解。而且當細胞內的EDEM水平降低時ERAD底物降解被減慢了。
他們的工作對于EDEM在內質網蛋白合成過程中的質量控制機制有了初步的探討。
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