2025年03月09日 14:34通派（上海）生物科技有限公司點擊量：34
細胞：Capan-1細胞
中文名稱：人胰腺癌細胞
生長特性：貼壁細胞
培養基：IMDM+20%FBS（GIBCO胎牛血清）
凍存條件：50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程（ 請嚴格遵照無菌操作）
1． 吸出原培養瓶中的培養基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通常控制在 1-2min）
2． 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰_酶，加 6~8ml 培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
3． 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養。
4． 注意培養基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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Ser294的磷酸化對PI4KIIIβ功能有什么作用？
磷酸化位點的突變使得PI4KIIIβ的脂激酶活性降低了60%。另外，與激酶失活的PKD突變體的顯性失活效應相統一的，過量表達激酶死亡PKD1降低了PI4KIIIβ的脂激酶活性。
突變也降低了熒光標記的分泌型蛋白質從TGN到細胞表面的運輸效率。PI4KIII的過量表達增加了標記蛋白到達細胞表面的數量。
總結起來，這些結果表明蛋白激酶和脂激酶對于分泌型蛋白運輸過程都非常重要。
科研人員認為，PKD在TGN的功能就像是“瓶頸”一樣進行調控：通過促使參與載體囊泡形成的蛋白質磷酸化，來控制分泌型分子的運輸。
PI4KIIIβ是這些底物中的一員，通過PKD介導的磷酸化增強了它的脂激酶活性。這個過程進而增加了TGN膜中的PI(4)P數量。
因為PI(4)P數量和膜結合的ADP-核糖基化因子，被認為是介導載體囊泡形成的重要成員。接下來，對于研究者們的挑戰將會是闡明載體囊泡形成的精確機制。
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