
2025年02月05日 15:17通派(上海)生物科技有限公司點擊量:33
細胞:SiHa細胞
中文名稱:人子宮頸鱗狀癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:1640 培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂?。┤サ粢萠酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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隨著其它基因變化一起,失活的Pax5驅動正常血細胞變成白血病細胞,重新復活Pax5能夠使細胞重新開始其正常發育并丟失那些類似癌癥的特性,有效地治療白血病。吸引我們的是只是回復Pax5就足夠使這些癌細胞恢復常態化,盡管其它基因是改變的。
白血病中,未成熟白血細胞復制異常并在骨髓中累積,干擾正常血細胞的產生。在兒童B-ALL中Pax5常常是一個‘消失’的基因。Pax5對于一種白血細胞——b細胞正常發育的,當Pax5功能缺乏抵抗力時,發育中的B細胞陷入一種不成熟狀態并且變成癌性的。
證明恢復Pax5功能,即使是在已經發生癌病的細胞中,移除這個‘阻塞’,使得細胞發育成正常白血細胞。研究揭示了Pax5的功能,是約100種已知‘抑制’人類腫瘤的基因之一。當這些腫瘤抑制基因通過改變DNA而被失活時,腫瘤開始發育。
這項工作揭示如何鈍化腫瘤抑制基因Pax5促成B-ALL發育以及白血病細胞如何變成‘熱愛’低Pax5水平以繼續激增??v使B-ALL細胞有多種基因突變,只是簡單的復活Pax5引起腫瘤細胞恢復正常發育并失去它們的癌變性質?!?/p>
強制B-ALL細胞重新開始它們的正常發育能夠為治療白血病提供一種新策略。然而B-ALL與其它癌癥相比相對容易預測,目前的治療可以持續多年而且具有重大副作用。通過了解特殊的基因改變如何驅動B-ALL,有可能產生行動更快且較少有副作用的特異療法。
腫瘤細胞中的基因缺失不是傳統上的藥物靶點。癌癥發育期間通過開發藥物恢復丟失基因的功能是非常困難的,然而通過了解Pax5缺失引起白血病的機制,我們就可以開始考慮開發藥物的方式,能夠像恢復Pax5功能一樣的效果。基因開關技術用于學習Pax5也能用于了解其它癌癥中的‘腫瘤抑制’基因。
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