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動(dòng)物支氣管炎病毒(AIBV)核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

2023年11月07日 09:43通派(上海)生物科技有限公司點(diǎn)擊量:457

動(dòng)物支氣管炎病毒(AIBV)核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)


實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

檢測(cè)動(dòng)物體液、腎臟、淋巴結(jié)、咽、泄殖腔試子、肺臟等組織標(biāo)本以及細(xì)胞培養(yǎng)液中傳染性支氣管炎病毒(AIBV)RNA,適用于傳染性支氣管炎病毒(AIBV)感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。


實(shí)驗(yàn)原理:

選取一對(duì)支氣管炎病毒(AIBV)特異性引物和一條特異性熒光探針,應(yīng)用Trizol提取RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶作用將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA,后者在Taq酶作用下,配以FQ-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體(dNTPs)等成分,用一步PCR熒光探針?lè)▽?duì)禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV) RNA進(jìn)行擴(kuò)增,從而達(dá)到快速檢測(cè)之目的。


標(biāo)本采集: 

1):咽及泄殖腔等試子標(biāo)本采集:用棉試子取咽或泄殖腔分泌物,將試子放入盛有1.0ml PBS(或生理鹽水)的離心管中,立即送檢。

2):組織標(biāo)本采集:取動(dòng)物肺、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)及胰腺等組織約1g,置入1.5ml潔凈EP管,立即送檢。

3):體液及培養(yǎng)液體標(biāo)本采集:取上述標(biāo)本約1ml,置入1.5ml潔凈EP管,立即送檢。


實(shí)驗(yàn)方法:

1):樣品處理:

培養(yǎng)物、試子等液體標(biāo)本:將標(biāo)本充分混勻,取100μ液體標(biāo)本加入500μl RNA提取液A(Trizol reagents)充分震蕩,室溫放置5min。

固體組織:取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿或剪刀剪碎,加入500μl RNA提取液A(Trizol reagents),研磨或振蕩至勻漿狀,轉(zhuǎn)移到1.5ml的EP管中,室溫放置5min。

2):加入100μl氯仿,用力震蕩15s,室溫靜置5min,4℃ 13,000rpm離心5min。

3):小心將上層水相轉(zhuǎn)移到干凈離心管中,加300 μl 無(wú)水乙醇,另加10μl RNA提取液B(內(nèi)含不溶物,使用前室溫溶解并充分混勻),充分混勻,13,000rpm離心1min。

4):.棄上清,加入500μl 75%的DEPC乙醇,充分混勻,13,000rpm離心1min,小心吸去大部分乙醇。

5):.將提取管敞口在室溫空氣中干燥5min待乙醇揮發(fā)干凈,用20µl DEPC H2O溶解沉淀。


陰性質(zhì)控品:取100μl陰性質(zhì)控品加入500μl RNA提取液A(Trizol reagents)充分震蕩,室溫放置5min。后按1.2~1.5操作。


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