Sh Ble基因篩選抗生素：Zeocin和腐草霉素區(qū)別

2019年06月10日 19:55上海懋康生物科技有限公司點(diǎn)擊量：1540

Sh Ble基因篩選抗生素：博萊霉素（Zeocin）和腐草霉素（Phleomycin）

（maokangbio整理，交流學(xué)習(xí)用)

博萊霉素（Bleomycins，BLMs）是由輪枝鏈霉菌（Streptomyces verticillus）代謝產(chǎn)生的一種抗腫瘤糖肽抗生素大家族，該家族的成員目前使用比較多的是博萊霉素（Bleomycin）家族和腐草霉素（Phleomycin）家族，前者主要用做抗腫瘤化合物，與其他的抗癌劑聯(lián)合使用，用于治療淋巴瘤、鱗狀細(xì)胞癌和睪完癌等。后者主要用作分子遺傳學(xué)研究中的一種選擇性抗生素，用來(lái)篩選攜帶抗性基因Sh ble等的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

我司（懋康生物）在銷(xiāo)售博萊霉素BLMs家族抗生素的過(guò)程中常遇到用戶詢問(wèn)幾種熱賣(mài)產(chǎn)品的區(qū)別，現(xiàn)做出以下解釋，供交流學(xué)習(xí)用。

對(duì)于腐草霉素（Phleomycin）（MS0008-1ML）, 是一種糖肽類(lèi)抗生素，結(jié)構(gòu)上類(lèi)似于抗生素Bleomycin (BLM)。純化的腐草霉素主要由腐草霉素D1（Phleomycin D1）（末端胺基是胍丁胺）以銅離子螯合和鹽酸鹽形式提供。腐草霉素阻斷細(xì)胞周期進(jìn)入S期，雖然腐草霉素類(lèi)似于Bleomycin，能破壞DNA，但不用作一種抗腫瘤劑。目前腐草霉素的作用機(jī)理并未*得以闡明，據(jù)報(bào)道由于修飾的二噻唑部分，其不能插入DNA。RAD6 DNA修復(fù)基因在突變酵母內(nèi)對(duì)腐草霉素抗性是必須的。

分子遺傳實(shí)驗(yàn)中腐草霉素用作一種選擇性抗生素，其具廣譜的毒性，對(duì)細(xì)菌、真核微生物和植物和動(dòng)物細(xì)胞呈體內(nèi)活性。腐草霉素因此能用于鑒定和篩選含腐草霉素抗性基因比如Sh ble基因的各種細(xì)胞。

對(duì)于Zeocin™（MS0009-125MG）是博萊霉素/腐草霉素（bleomycin/phleomycin）抗生素家族的成員之一，從輪枝鏈霉菌Streptomyces verticillus中分離得到，對(duì)細(xì)菌、真菌（包括酵母菌）、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞具很強(qiáng)的毒性。Zeocin™是腐草霉素D1的商業(yè)名稱，一種堿性、水溶性、銅離子螯合的糖肽抗生素。銅離子的存在使得溶液為藍(lán)色，此銅螯合的形式為無(wú)活性。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，二價(jià)銅離子（Cu2+）被還原為一價(jià)銅離子（Cu+），并被細(xì)胞內(nèi)的巰基化合物去除。銅離子被去除后，Zeocin™被活化，嵌入DNA使其斷裂，終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

腐草霉素（Phleomycin）與Zeocin™有效成分基本差不多，這也是這兩種化合物的CAS號(hào)是一致的。但也有些許差異，腐草霉素（Phleomycin）建議用于對(duì)Zeocin™敏感性比較差的細(xì)胞，比如：絲狀真菌和某些酵母菌。

腐草霉素（Phleomycin）與Zeocin™的基本特性（見(jiàn)下表格）：更多信息請(qǐng)見(jiàn)maokangbio整理內(nèi)容。

基本特性	腐草霉素（Phleomycin）	博萊霉素（Zeocin™）
編號(hào)	MS0008-1ML（20MG）/5ML	MS0009-125MG/1G
報(bào)價(jià)	598/2768	420/2850
CAS NO.	11006-33-0	11006-33-0
外觀	藍(lán)色溶液（20mg/ml）	藍(lán)色溶液（100mg/ml）
篩選濃度	大腸桿菌篩選：25-50μg/mL（低鹽LB培養(yǎng)基，NaCl濃度不能超過(guò)5g/L）酵母菌篩選：50-300μg/mL（YPD或基本培養(yǎng)基）哺乳動(dòng)物細(xì)胞篩選：50-1000μg/mL（合適培養(yǎng)基，根據(jù)細(xì)胞系而不同）	大腸桿菌：含5µg/ml腐草霉素的低鹽LB固體培養(yǎng)基；酵母菌：含10µg/ml腐草霉素的YEPD培養(yǎng)基；真菌：含10-50µg/ml腐草霉素的再生培養(yǎng)基，取決于宿主菌敏感性。植物細(xì)胞：5-25µg/ml腐草霉素，取決于植物類(lèi)型；動(dòng)物細(xì)胞：5-50 µg/ml腐草霉素，初次實(shí)驗(yàn)使用殺滅曲線來(lái)篩選加工作濃度；

Sh ble基因賦予抗性的原理：來(lái)自Streptoalloteichus hindustanus的Sh ble基因編碼一種13,665Da大小的蛋白，該產(chǎn)物以化學(xué)計(jì)量方式結(jié)合Zeocin或phleomycin，抑制其DNA雙鏈切割活性。因此，能表達(dá)此蛋白的宿主細(xì)胞被賦予Zeocin或phleomycin抗性。

—Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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