Deoxyribonuclease I (DNase I) 脫氧核糖核酸酶I，來源于牛胰腺

（凍干粉形式，即用型液體形式，懋康生物）

關(guān)鍵詞：

脫氧核糖核酸酶I DNase I；核糖核酸酶 RNase；核酸酶 Benzonase；Sigma D5025； Sigma DN25；CAS：9003-98-9；

需求背景：

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，在RNA樣品的制備過程中，常常會(huì)受到樣品中不可避免存在的DNA的干擾，為了保證RNA樣品的純度以及滿足后續(xù)RNA相關(guān)研究的順利開展，需要DNase I有針對(duì)性的酶解DNA。另外，在蛋白制品的生產(chǎn)中比如抗體，重組蛋白，細(xì)胞裂解這步釋放的內(nèi)含物中除掉蛋白外，往往有很高含量的核酸（DNA, RNA），核酸的存在嚴(yán)重干擾制品的純化和活性，為此，利用DNase I和RNase組合方式來去除核酸干擾，也很必要。還有，在其他的實(shí)驗(yàn)比如TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)中常用DNase I對(duì)細(xì)胞樣本核酸進(jìn)行剪切，以得到實(shí)驗(yàn)所需的陽性對(duì)照。

基本介紹：

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，在大多數(shù)細(xì)胞和組織中都能發(fā)現(xiàn)的一種核酸內(nèi)切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5’端為磷酸基團(tuán)、3’端為羥基的多聚核苷酸（見下圖反應(yīng)流程圖），平均消化產(chǎn)物zui小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機(jī)識(shí)別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點(diǎn)；而在Mn2+存在條件下，DNase I識(shí)別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點(diǎn)進(jìn)行切割。DNase I可水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質(zhì)（其切割速率受組蛋白影響）。

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，zui早從胰腺中分離而來，至今哺乳動(dòng)物胰腺也是zui主要的來源之一。DNase I以兩對(duì)二硫鍵結(jié)合的多種糖蛋白混合形式存在。zui加的工作范圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價(jià)金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護(hù)酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。

主要應(yīng)用：

◇   制備不含DNA的RNA樣本；

◇   RT-PCR反應(yīng)前RNA樣本內(nèi)基因組DNA等可能存在DNA污染的去除；

◇   T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉(zhuǎn)錄后DNA模板的去除；

◇   DNase I足跡法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用；

◇   缺口平移法標(biāo)記探針用；

◇   制備隨機(jī)DNA片段文庫；

◇   TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)中用于剪切DNA制備陽性對(duì)照；

我司（懋康生物MKBio）提供的脫氧核糖核酸酶I（DNase I），來源于牛胰腺，通過親和色譜純化所得，不含RNase和蛋白酶污染。為了滿足工業(yè)用戶和科研用戶的不同應(yīng)用需求，我們提供凍干粉（不同比活）和即用型液體形式的DNase I。具體信息如下：

一、脫氧核糖核酸酶I（DNase I）（凍干粉形式，比活力≥2000 Kunit U/mg protein）

1.1 產(chǎn)品特征：

1）   CAS NO：9003-98-9

2）   蛋白純度：≥80%（biuret），色譜純化

3）   比活力：≥2000Kunit Units/mg protein

4）   活力定義：25℃，pH5.0條件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分鐘ΔA260增加0.001的變化定義為一個(gè)酶活力單位（Kunitz unit）。

5）   激活劑：多種二價(jià)金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

6）   抑制劑：β-巰基乙醇；螯合劑；SDS；肌動(dòng)蛋白；并沒有特異性抑制DNase I酶活的通用抑制劑，比如檸檬酸鹽抑制Mg2+活化的DNase I，但不能影響Mn2+激活的DNase I。

7）   溶解性：溶于0.15M NaCl（5mg/ml），無色透明溶液

1.2 訂購信息：產(chǎn)品性能媲美Sigma D5025，本品生產(chǎn)至少十年以上，銷售到國內(nèi)各大實(shí)驗(yàn)室，歡迎各大工業(yè)和科研用戶前來咨詢。：，。

二、脫氧核糖核酸酶I（DNase I）（凍干粉形式，比活力≥500 Kunit U/mg protein）

2.1 產(chǎn)品特征：

8）   CAS NO：9003-98-9

9）   分子量：~31 kDa

10）同義名：DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶，脫氧核糖核酸酶A

11）  比活力：≥500 Kunit Units/mg protein

12）  活力定義：在50µl含40mM Tris-HCl, pH8.0，2.5 mM MgSO4，1mM CaCl2的反應(yīng)緩沖體系中，37℃，10min內(nèi)*降解1µg λ-DNA所需的酶量即為一個(gè)活力單位。此反應(yīng)條件下得到的一個(gè)單位DNase活力約等于一個(gè)Kuntiz unit。

13）  激活劑：多種二價(jià)金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

14）  抑制劑：EGTA，EDTA，鹽離子濃度（＞100mM）都能降低DNase活性

15）  熱失活：含終止溶液（20mM EGTA，pH 8.0）內(nèi)65℃，處理10min

16）  溶解性：溶于緩沖液（≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油）

2.2 訂購信息：產(chǎn)品性能媲美Sigma DN25。比活低于MF0401（≥2,000 Kunit U/mg protein），價(jià)格更加經(jīng)濟(jì)。，：，。

三、脫氧核糖核酸酶I（DNase I）（即用型溶液）

3.1 產(chǎn)品特征：

試劑盒形式提供，其中DNase I以即用型溶液(1U/μl) 形式提供，酶經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控能*的消化模板；還提供10× Reaction Buffer和10× Stop Solution，節(jié)省了試劑配制的時(shí)間，用起來更加快捷。

3.2 試劑盒包裝：

3.4  訂購信息：即用型試劑盒，科研單位且用量不多用戶的首要選擇。，：，。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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