冷凍細胞該如何解凍

2017年03月31日 16:42上海邦景實業(yè)有限公司點擊量：325

細胞株冷凍細胞解凍程序:
1.依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單之基礎培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應不同之基礎培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌瑫r，務必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細胞適應后，方進行所需之實驗。
2.FBS(fetalbovineserum,胚牛血清),CS(calfserum,小牛血清)和HS(horseserum,馬血清)，對細胞而言差異極大，請務必依據(jù)細胞株資料單之血清種類培養(yǎng)之。
3.將潔特培養(yǎng)基置于37C水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。取出潔特冷凍管，立即放入37C水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖潔特冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。
4.依據(jù)細胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取10ml培養(yǎng)基加至T25或T75flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25或T75JET培養(yǎng)瓶內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37C，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
5.對絕大多數(shù)細胞而言，1%以下之冷凍保護劑DMSO，不會對細胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細胞中去除，待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細胞分化之細胞，需立即去除DMSO者，則可將解凍后之細胞懸浮液放入5-10ml潔特培養(yǎng)基中，離心300xg(約1000rpm)，5分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮的潔特培養(yǎng)基，將細胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至潔特培養(yǎng)瓶中，再放入37°C，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
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細胞株

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