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技術文章

牛甘丙肽(GAL)酶聯免疫分析試劑盒

閱讀:361發布時間:2015-9-9

牛甘丙肽(GAL)酶聯免疫分析試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:
96T
0.6ng/L – 20ng/L
使用目的:
本試劑盒用于測定牛血清樣本中甘丙肽(GAL)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛甘丙肽(GAL)。用純化的牛甘丙肽(GAL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入甘丙肽 (GAL),再與  HRP標記的甘丙肽 (GAL)抗體    ,形成抗體 -抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TB 顯色。TB 在 HRP  酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甘丙肽(GAL)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中牛甘丙肽(GAL)濃度。
試劑盒組成
30倍濃
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2   酶標試劑
標準品(40ng/L)
標準品稀釋液
3   酶標包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個
標本要牛甘丙肽(GAL)酶聯免疫分析試劑盒
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過(HRP)活性。
操作步驟
1.  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
20ng/L
10ng/L
5ng/L
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150μl的原倍標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  5號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  4號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  3號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  2號標準品加入  150μl標準品稀釋液
2.5ng/L
1.25ng/L
2.  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。牛甘丙肽(GAL)酶聯免疫分析試劑盒

溫育:用封板膜封板后37℃溫育30分鐘。30倍稀釋后備用
配液:將 30倍濃
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜重復 5次,拍干。30秒后棄去,如此
加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。
操作程序總:
計算以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,


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