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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-03-14 18:22:43瀏覽次數(shù):288次
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人內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
21411 槐角堿 HPLC≥98% 20mg/支
21412 胡蘆巴堿 trigonelline HPLC≥98% 20mg/支
21413 *(祖師麻甲素) Daphnetin HPLC≥98% 20mg/支
21414 小白菊內(nèi)酯 parthenolide HPLC≥98% 20mg/支
21415 Polyphyllin A HPLC≥98% 20mg/支
21416 重樓皂甙B Polyphyllin B HPLC≥98% 20mg/支
21417 重樓皂甙C Polyphyllin C HPLC≥98% 20mg/支
21418 重樓皂甙E Polyphyllin E HPLC≥98% 20mg/支
21419 重樓皂甙F Polyphyllin F HPLC≥98% 20mg/支
21420 烏金甙 HPLC≥98% 20mg/支
21421 獐牙菜甙 HPLC≥98% 20mg/支
21422 豆腐果甙 Helicid HPLC≥98% 20mg/支
21423 * Huperzine-A HPLC≥98% 20mg/支
21424 川陳皮素 Nobiletin HPLC≥98% 20mg/支
21425 告達(dá)亭甙元 HPLC≥98% 20mg/支
21426 青陽參甙元A HPLC≥98% 20mg/支
21427 青陽參甙元B HPLC≥98% 20mg/支
21428 重樓皂苷D Polyphyllin D HPLC≥98% 20mg/支
21429 圣草素-7-0-葡萄糖甙 HPLC≥98% 20mg/支
21430 圣草次苷 Eriocitrin HPLC≥98% 20mg/支
21431 圣草酚 Eriodictyol HPLC≥98% 20mg/支
21432 * Bulleyaconitine A HPLC≥98% 20mg/支
21433 L-4-羥基異* L-4-Hydroxyisoleucine HPLC≥98% 20mg/支
21434
21435 亞麻木酚素(SDG) Secoisolariciresinol Diglucoside HPLC≥98% 20mg/支
21436 α-倒捻子素 α-mangostin HPLC≥98% 20mg/支
21437 β-倒捻子素 β-mangostin HPLC≥98% 20mg/支
21438 3-異倒捻子素 3-isomangostin HPLC≥98% 20mg/支
21439 菊苣酸 Cichoric Acid HPLC≥98% 20mg/支
21440 梭砂貝母堿 HPLC≥98% 10mg/支
21441 地膚子皂苷Ic Momordin Ic HPLC≥98% 20mg/支
21442 大薊苷(柳穿魚葉苷) Pectolinarin HPLC≥98% 20mg/支
21443 2"-O-沒食子酰基金絲桃苷 2"-O-galloylhyperin HPLC≥98% 20mg/支
21444 9-甲氧基* 9-methoxycamptothecine HPLC≥98% 20mg/支
21445 鹽酸石蒜堿 Lycorine chloride HPLC≥98% 20mg/支
21446 光甘草定 Glabridin HPLC≥98% 20mg/支
21447 橙黃決明素 aurantio-obtusin HPLC≥98% 20mg/支
21448 荷葉堿 Nuciferine HPLC≥98% 20mg/支
21449 鷹嘴豆芽素A Biochanin A HPLC≥99% 20mg/支
21450 10-羥基* 10-hydroxycamptothecin HPLC≥99% 20mg/支
21451 * Theobromine ≥99% 20mg/支
21452 D-* D-Pinitol 95% 20mg/支
21453 常春藤皂苷元 Hederagenin HPLC≥98% 20mg/支
21454 花椒毒素 8-Methoxypsoralen HPLC≥98% 20mg/支
21455 白花前胡醇 Peucedanol HPLC≥98% 20mg/支
21456 佛手柑內(nèi)酯,香柑內(nèi)酯,5-甲氧基補(bǔ)骨脂素
5-Methoxypsoralen ≥99% 人內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒20mg/支
21457 肉堿 L-Carnitine inner salt 98% 20mg/支
21458 矢車菊素-3-0-葡糖糖苷 cyanidin-3-O-glucoside HPLC≥98% 10mg/支
21459 氯化矢車菊素 Cyanidin Chloride HPLC≥94% 10mg/支
21460 5-羥色胺酸(5-HTP) 5-HTP HPLC≥98% 20mg/支
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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