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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2016-12-27 02:11:27瀏覽次數(shù):312次
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魚類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
魚類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在魚類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
11776 膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Annexin A5 (ANXA5) 48T/96T Chicken (Gallus)
11777 膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Annexin A5 (ANXA5) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
11778 載脂蛋白C1(APOC1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Apolipoprotein C1 (APOC1) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11779 載脂蛋白C1(APOC1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Apolipoprotein C1 (APOC1) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11780 載脂蛋白C1(APOC1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Apolipoprotein C1 (APOC1) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
11781 線粒體肌酸激酶1A(CKMT1A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Creatine Kinase, Mitochondrial 1A (CKMT1A) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11782 線粒體肌酸激酶1A(CKMT1A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Creatine Kinase, Mitochondrial 1A (CKMT1A) 48T/96T Chicken (Gallus)
11783 線粒體肌酸激酶1A(CKMT1A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Creatine Kinase, Mitochondrial 1A (CKMT1A) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11784 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Transferrin Receptor 2 (TFR2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11785 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Transferrin Receptor 2 (TFR2) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11786 白介素6(IL6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 6 (IL6) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11787 白介素6(IL6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 6 (IL6) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11788 白介素6(IL6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 6 (IL6) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11789 抗腦組織抗體(ABAb)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Anti-Brain Tissue Antibody (ABAb) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
11790 白介素8(IL8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 8 (IL8) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11791 白介素8(IL8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 8 (IL8) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11792 白介素8(IL8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 8 (IL8) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11793 白介素9(IL9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 9 (IL9) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
11794 *(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Anti Mullerian Hormone (AMH) 48T/96T Chicken (Gallus)
11795 *(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Anti Mullerian Hormone (AMH) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11796 瘦素受體(LEPR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leptin Receptor (LEPR) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11797 白血病抑制因子(LIF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leukemia Inhibitory Factor (LIF) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11798 白血病抑制因子(LIF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leukemia Inhibitory Factor (LIF) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11799 白血病抑制因子(LIF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leukemia Inhibitory Factor (LIF) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11800 白血病抑制因子(LIF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leukemia Inhibitory Factor (LIF) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11801 瘦素(LEP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leptin (LEP) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11802 瘦素(LEP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leptin (LEP) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11803 瘦素(LEP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leptin (LEP) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11804 L選擇素(SELL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Selectin, Leukocyte (SELL) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11805 單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 2 (MCP2) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11806 單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 2 (MCP2) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11807 單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 2 (MCP2) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11808 單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 2 (MCP2) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11809 巨噬細(xì)胞來源趨化因子(MDC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Macrophage Derived Chemokine (MDC) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11810 抗平滑肌抗體(ASMA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Anti-Smooth Muscle Antibody (ASMA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11811 組織蛋白酶K(CTSK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
11812 組織蛋白酶K(CTSK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11813 組織蛋白酶K(CTSK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11814 組織蛋白酶K(CTSK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK) 48T/96T Chicken (Gallus)
11815 組織蛋白酶K(CTSK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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