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上海撫生實業有限公司
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人骨保素（OPG）Elisa Kit檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。
公司采用人骨保素（OPG）Elisa Kit的全是進口原材料研，發靈敏性高，高效性，*抗體，吸附均勻、吸附性好，回收利用率高、可靠性強，無效包退包換，公司提供免費代測服務，各種種屬ELISA試劑盒產品齊全，質量可靠。
產品名稱 | 人骨保素（OPG）Elisa Kit |
英文名稱 | Human OPG ELISA Kit |
規格 | 48T/96T |
人骨保素（OPG）Elisa KitHuman OPG ELISA Kit
骨保素(OPG)是一種分泌型糖蛋白，屬于TNF受體超家族成員，具有TNF受體超家族特征性的N端富含半*區域，其分子結構與TNFR-2及CD40尤其相似，但它不含跨膜疏水區，小鼠OPG與人、大鼠的同源性分別為85%和95%，提示OPG基因在進化中的高度保守。OPG分子由401個氨基酸組成，N端21個氨基酸為信號肽，經糖基化后，成熟的OPG分子包含380個氨基酸，在胞內先形成55 ku的單體，隨后兩條肽鏈間的Cys400形成二硫鍵，以110 ku的同源二聚體形式分泌至胞外，每條OPG多肽鏈包含23個半*，可形成9對二硫鍵，整個蛋白質分為7個結構域，并形成3個功能區：TNF受體結構區，包括結構域1～4，尤其是Cys185之前部分，是OPG主要的功能區域，執行抑制破骨細胞的功能；死亡域同源區5和6，與Fas蛋白跨膜區形成融合蛋白后具有很強的細胞毒性，可以引起細胞凋亡；肝素結合結構區，其作用尚不明確。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經*（biotin）標記。樣品和*標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。
試劑準備：
1. 人骨保素（OPG）Elisa Kit使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。
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樣本處理及要求：
1. 人骨保素（OPG）Elisa Kit血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。
仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
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