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更新時間:2016-03-25 01:51:35瀏覽次數:492次
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CD86抗原多克隆抗體主要是將有效抗原注入人體或動物,由人或動物體內的B細胞產生抗體
CD86抗原單克隆抗體的免疫抗原,從純度上說雖不要求很高,但高純度的抗原使得到所需單抗的機會增加,同時可以減輕篩選的工作量。因此,免疫抗原是越純越好,應根據所研究的抗原和實驗室的條件來決定。 熒光素標記異硫氰酸熒光素(FITC)標記FITC標記抗體的原理是在堿性條件下,FITC 的異硫氰基能與IgG的自由氨基結合,形成IgG與熒光素的結合物。FITC是zui常用的熒光素,其次選用TRITC(四甲基異硫氰酸羅丹明)。FITC和TRITC是常用的雙標記組合。 CD86抗原其標記步驟如下:以碳酸鹽緩沖液(PH9.3,Na2CO3 8.6g,NaHCO3 17.3g,蒸餾水1000ml)調整抗體濃度至10mg/ml。b. 取5ml抗體溶液置于10ml小燒杯中。c. 稱取1mg FITC溶于0.2ml DMSO中,待溶解后立即緩慢滴加于抗體液內,邊加邊輕攪;其后室溫避光作用2小時。d. 將交聯物經Sephadex G25或G50柱層析除去游離的熒光素;分管收集*峰為標記的抗體。e. FITC的結合物質量鑒定IgG量(mg/ml)=(OD280-OD495×0.35)/1.4F/P=2.87×OD495/(OD280-OD495×0.35),一般說,FITC對抗體的摩爾比為3:1時適合于組織切片染色,為5-6:1時適合于細胞懸液染色。以標記抗體染色各種抗原,測定其特異性染色滴度和非特異染色的程度。f. 標記抗體的保存:宜保存于4℃,加NaN3防腐。B、 異硫氰酸羅丹明(TRITC)標記: 基本與FITC標記相同。同位素標記公司產品詳情請參閱有關詳細論述鏈接點擊:Anti-XRCC1(X-ray Repair Cross Complementing 1)??X射線修復交叉互補蛋白/細胞堿基切除修復基因抗體Anti-ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1)??ZCWCC1抗體Anti-Z-DEVD-FMK(CASPASE3/CPP32 INHIBITOR W-3)??CASPASE3凋亡抑制劑Anti-ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- middle (1b)??鋅指脂蛋白-1b抗體Anti-ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- middle (1c)??鋅指脂蛋白-1c抗體Anti-ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- N-terminal (1a) Anti-ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- N-terminal (1a)??鋅指脂蛋白-1a抗體Anti-ZNF300 (zinc finger protein ZNF300)- middle??鋅指蛋白300抗體anti-ZO-1(zonula occludens-1)??胞質緊密粘連蛋白1抗體Anti-β-Actin/HRP??辣根過氧化物酶標記β-肌動蛋白(抗體)Anti-人T亞群/NK細胞檢測試劑盒??人T淋巴細胞亞群檢測盒 ????????(T-SuRCet)CD2AP (CD2-associated protein)??白細胞分化抗原CD2AProtein??蛋白質RCA (bovine serum albumin) ??牛血清白蛋白必須強調的是在使用同位素標記單抗或其他蛋白之前,應掌握同位素操作和防護知識。正常情況下應包括避免物理的接觸和對γ-射線照射的有效保護,操作和使用同位素標記抗體時,應利用防護裝置,并合理處置含放射性的廢料。碘標記用碘標記抗體是一種有效的標記方法。125I衰變產生低能的γ和Χ射線,很容易被檢測出來,而其60天的半衰期保證足夠的有效使用期,且能很方便地處理放射廢料。zui常用的碘標記方法是氯胺T法,即將氧化劑氯胺T加入到抗體和碘化物的溶液中,Na125I在氯胺T作用下I轉化成I2,游離I2可與抗體分子中*和一些*發生鹵化反應,用還原劑和游離*終止反應,經凝膠過濾將標記的抗體與碘化*及還原劑分離開。其主要操作步驟如下:a. 在進行標記之前,先選用截流分子量為20000-50000的凝膠,制備1ml凝膠柱,然后分別用10倍體積的1%BSA/PBS/0.02%疊氮鈉和PBS洗滌柱體,封住柱下口,備用。b. 加入10ug純化單抗至含有25ul 2.5mol/L磷酸鈉(PH7.5)的1.5ml指形管內。隨后,加入500uCi Na125I混勻。c. 加入25ul新配制的2mg/ml氯胺T。室溫放置60秒。再加入50ul氯胺T終止液(含2.4mg/ml偏重亞硫酸鈉,10mg/ml*,10%甘油和0.1%環乙烷酰二甲苯的PBS)。d. 將上述碘標記物上樣在凝膠柱表面,小心放開柱體下口,用1.5ml指形管收集。當碘標記物全部進入柱體,加入0.3ml含0.03%疊氮鈉的PBS,用另一指形管收集0.3ml,然后再加0.3ml 0.03% NaN3 PBS,下口收集0.3ml,重復進行,同時用同位素檢測儀測定標記與未標記的單抗。標記抗體大約在第二至第四管出現。無害化處理柱子和非單抗標記部分。e. 將標記單抗保存于4℃可使用6周時間。B、 生物合成法標記將雜交瘤細胞培養在含有放射性前體的培養基中,隨著抗體分子的合成、組裝,同位素會標記在抗體分子的初級氨基酸鏈上,本方法不會導致抗體活性的喪失。其主要步驟是: 離心收集處于對數生*的雜交瘤細胞,約需2×106個細胞。以預熱37℃不含*的培養基洗滌上述細胞。b. 用含2% PBS不含*的培養基懸浮雜交瘤細胞至106個/ml,加入35S*(每次加入100uCi可產生105-106cpm的抗體)。c. 經C02培養箱中培養過夜,離心后,吸出培養上清,分別加入1/20體積的1mol/L Tris(PH8.0)及疊氮鈉至濃度0.02%。該標記抗體可按純化單抗方法進行。
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