丙酮酸激酶-M2抗體 動物體內單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動物體內單抗的方法,鑒于絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內,在小鼠腹腔內生長雜交瘤,并產生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便、經濟,不過,腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動物病毒的危險,故而用SPF級小鼠。 丙酮酸激酶-M2抗體A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數生*的雜交瘤細胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養基稀釋的雜交瘤細胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時,皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價,分裝,-70℃凍存備用,或凍干保存。
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Human Collagen Type Ⅳ,Col Ⅳ 人Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)
Human Collagen Type Ⅲ,Col Ⅲ 人Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)
Human Laminin,LN 人層連蛋白/板層素(LN)
Human Fibronectin,FN 人纖連蛋白(FN)
Human Fibronectin,FN 人纖連蛋白(FN)
Human anti-Nogo-A antibody,NOGO-A Ab 人NOGO-A抗體(Nogo-A Ab)
Human Anti-tissue tranGSlutaminase IgA,tTG-IgA 人抗組織轉*酶抗體IgA(tTG-IgA)
Human anti-Survivin antibody,Surv 人抗存活素抗體/生存蛋白(Surv)
Human anti-Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor antibody,GM-CSF Ab 人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子抗體(GM-CSF Ab)
Human Anti-titin Antibody,TTN 人抗肌聯蛋白抗體(TTN)
Human anti-presynaptic membrane antibody,PsmAb 人抗突觸前膜抗體(PsmAb)
Human Angiotensin Ⅱ Receptor 2 antibody,AT2R-Ab 人血管緊張素Ⅱ受體2抗體(AT2R-Ab)
Human angiotension Ⅱ receptor 1 Antibody,ATⅡR1 Ab 人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)
Human angiotension I receptor Antibody,ANG-ⅠR antibody 人血管緊張素Ⅰ受體抗體(ANG-ⅠR)
Human ovalbumin specific IgG,OVA sIgG 人卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)
Human anti-calmodulin specific antibody,CaM-ab 人抗鈣調素特異抗體(CAM-ab)
Human thyroid hormone autoantibodies,THAA 人甲狀腺非肽激素抗體(THAA)
Human steroid producing cell autoantibody,SCA 人抗類固醇生成細胞抗體(SCA)
Human granulocyte specific antinuclear antibody,GS-ANA 人粒細胞特異性抗核抗體(GS-ANA)
Human signal recognization particle antibody,SRP 人抗信號識別顆粒抗體(SRP)
(2) 體外培養單抗的方法總體上講,雜交瘤細胞系并不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養,又可以進行懸浮培養。雜交瘤細胞的單層細胞培養法是各個實驗室zui常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養瓶中,以含10-15%小牛血清的培養基培養,細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規模。要想在體外大量制備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養。單位體積內細胞數量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產量就越大。