*乙酰轉移酶抗體 動物體內單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動物體內單抗的方法,鑒于絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內,在小鼠腹腔內生長雜交瘤,并產生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便、經濟,不過,腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動物病毒的危險,故而用SPF級小鼠。 *乙酰轉移酶抗體A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數生*的雜交瘤細胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養基稀釋的雜交瘤細胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時,皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價,分裝,-70℃凍存備用,或凍干保存。
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Human alcohol dehydrogenase,ADH 人乙醇脫氫酶(ADH)
Human aldehyde dehydrogenase,ALDH 人乙醛脫氫酶(ALDH)
human Rho family GTPase 1,RND1 人Rho家族GTP酶1(RND1)
human receptor TNFRSF-interacting serine-threonine kinase 2,RIPK2 人受體TNFRSF結合**激酶2(RIPK2)
human phospholipid scramblase 1,PLSCR1 人磷脂爬行酶1(PLSCR1)
human 3-hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzyme A synthase 1,HMGCS1 人3-羥基-3-甲基戊二酰*合酶1(HMGCS1)
human eosinophil-associated ribonuclease A family member 12,EAR12 人嗜酸性白血球相關之RNA水解酵素家族成員12(EAR12)
human eosinophil-associated ribonuclease A family member 3,EAR3 人嗜酸性白血球相關之RNA水解酵素家族成員3(EAR3)
human eosinophil-associated ribonuclease A family member 2 人嗜酸性白血球相關之RNA水解酵素家族成員2(EAR2)
human dihydropyrimidinase-like 3,DPYSL3 人二氫嘧啶酶樣3(DPYSL3)
human tryptophanyl-tRNA synthetase,WARS 人色氨酰tRNA合成酶(WARS)
human hexokinase 3,HK3 人己糖激酶3(HK3)
human phosphofructokinase-plaet,PFKP 人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)
human UDP-glucose ceramide glucosyltransferase 人尿苷二磷酸葡萄糖神經酰胺葡萄糖基轉移酶(UGCG)
(2) 體外培養單抗的方法總體上講,雜交瘤細胞系并不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養,又可以進行懸浮培養。雜交瘤細胞的單層細胞培養法是各個實驗室zui常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養瓶中,以含10-15%小牛血清的培養基培養,細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規模。要想在體外大量制備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養。單位體積內細胞數量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產量就越大。