詳細介紹
產品名稱:考馬斯亮藍R*
:021—60449724,
C A S 號:6104-59-2
產品單位:gm
產品規格:5/10/50
化學性質
考馬斯亮藍有G250和R250兩種。
考馬斯亮藍G-250在游離狀態下呈紅色,zui大光吸收在465nm;當它與蛋白質結合后變為青色,蛋白質-色素結合物在595nm波長下有zui大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比。
考馬斯亮藍R250與蛋白質反應雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。
考馬斯藍染色
coomassie blue一定范圍內與蛋白質濃度成正比,因此可用于蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法是1976年Bradford建立,試劑配制簡單,操作簡便快捷,反應非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質含量,測定蛋白質濃度范圍為0~1 000μg/mL,是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。
考馬斯亮藍有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍G250由于與蛋白質的結合反應十分迅速,常用來作為蛋白質含量的測定。250與蛋白質反應雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。
1.Bradford濃染液的配制:
將100mg考馬斯亮藍G-250溶于50m1 95%乙醇,加入100ml濃磷酸,然后,用蒸餾水補充至200ml,此染液放4℃至少6個月保持穩定。
2.標準曲線蛋白質樣本的準備:
盡量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標準品,例如測定抗體,可用純化的抗體作為標準。如果待測樣本是未知的,也可用抗體作為標準蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之間繪制標準曲線。
3.溶解:
將待測樣本溶于100~1緩沖溶液中,該緩沖溶液應與制作標準曲線的緩沖溶液相同(用PBS)。
4.稀釋:
按1:5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液,如出現沉淀,過濾除去。
5.作用:
每個樣本加5ml稀釋的染料結合溶液,作用5~30min。染液與蛋白質結合后,將由紅色變為藍色,在595nm波長下測定其吸光度。注意,顯色反應不得超過30min.
6.計算:
根據標準曲線計算待測樣本的濃度。
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