細胞培養操作：

1) 復蘇細胞：將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜 (或將細胞懸液加入 6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養基，培養過夜) 。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。 a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去 消化液，將培養瓶置于 37℃培養箱中消化 1 -3min (視細胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。        。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。

3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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細胞系/株：

1、細胞系（Cell Line）：原代培養舞經傳代成功即成細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系（Lineage of Cells）所組成。

2、細胞株（Cell Strain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。如果不能繼續傳代或傳代數有限，稱為有限細胞株（finitecell strain）；如果可以連續傳代，稱為連續細胞株（continuous cell strain）。對于人類腫瘤細胞，在體外培養半年以上，生長穩定，并連續傳代的即可稱為連續性株或系。

（一）初代培養

初代培養又稱原代培養，即直接從體內取出的細胞、組織和器官進行的第一次的培養物。一旦已進行傳代培養（Subculture）的細胞，便不再稱為初代培養，而改稱為細胞系。

（二）細胞系

初代培養物開始第一次傳代培養后的細胞，即稱之為細胞系。如細胞系的生存期有限，則稱之為有限細胞系（Finite Cell Line）；已獲無限繁殖能力能持續生存的細胞系，稱連續細胞系或無限細胞系（Infinite Cell Line）。無限細胞系大多已發生異倍化，具異倍體核型，有的可能已成為惡性細胞，因此本質上已是發生轉化的細胞系。無限細胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留接觸抑制和無異體接種致癌性；有的不僅有永生性，異體接種也有致瘤性，說明已惡性化。這兩種不同性質的無限細胞系，在國內外文獻中對這些名詞的應用上也常不十分嚴格。為概念上的明確，本書中對有惡性的無限細胞系采用!°惡性轉化細胞系!±一詞表示可能更妥。而對那些只具永生性而無惡性的細胞系，則用無限細胞系或轉化細胞系即可。當前流傳的 NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均屬這類細胞系。

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