細胞培養(yǎng)注意事項：

公司產(chǎn)品僅用于科研關于原代細胞培養(yǎng)的注意事項。原代細胞培養(yǎng)是一項非常重要的實驗技術，掌握好這些注意事項，能讓你的實驗更順利。

首先，無菌操作是關鍵。一定要保持操作環(huán)境的清潔，避免細菌或霉菌污染，否則實驗就會失敗。

其次，選擇適合的培養(yǎng)基和血清也很重要。不同細胞對培養(yǎng)基和血清的需求不同，所以要根據(jù)細胞類型來選擇合適的培養(yǎng)基和血清。

另外，也是細胞培養(yǎng)中的成分。要新鮮配制，在貯存過程中也要定期補充。

在細胞培養(yǎng)過程中，靜置培養(yǎng)也是非常重要的。細胞在消化分離后需要一定的時間來適應新環(huán)境，所以在這段時間內(nèi)要避免頻繁取出培養(yǎng)瓶觀察。

此外，消化時間也要控制得當。通常消化至肉眼可見微小組織顆粒即可，過長的消化時間會導致細胞損傷加重，影響細胞培養(yǎng)成活率。

最后，對于一些特殊類型的細胞，可能需要添加一些特殊的生長因子來促進細胞生長和增殖。但需要注意的是，這些生長因子的費用通常較高。

一、細胞基本屬性

細胞名稱：人NK細胞

組織來源：外周血

種屬來源：人

細胞簡介：自然殺傷細胞(natural killer cell ，  NK)是機體重要的免疫細胞 ，不僅與抗腫瘤、   抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關 ，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病  的發(fā)生。一種穩(wěn)定表達在NK和LAK細胞表面的LAK-1分子 ，  120kDa ，  NK細胞在 IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽性 ，而HNK-1(CD57)  和CD16部分消失。  LAK 的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。

自然殺傷細胞刺激因子  (natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對NK細胞 有刺激作用。  IL-2、  IL-12、  IFN-α、TNF-α以及白細胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin,LR) 對NK細胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用 ，   體外培養(yǎng)時加入上述細胞因子可明顯提  高NK的殺傷活性。前列腺素 (PG)E1、  E2、  D2和腎上腺皮質(zhì)激素等對NK細胞的  活性有抑制作用。

培養(yǎng)基：原代NK細胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：懸浮培養(yǎng)

傳代特性：根據(jù)細胞特性傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%；  CO2 ，  5%

二、使用方法：

人NK細胞是一種懸浮培養(yǎng)細胞，細胞形態(tài)呈，在技術部標準操作流程下，細胞可傳根據(jù)細胞特性傳代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

公司正在出售的產(chǎn)品：