細胞培養注意事項：

公司產品僅用于科研關于原代細胞培養的注意事項。原代細胞培養是一項非常重要的實驗技術，掌握好這些注意事項，能讓你的實驗更順利。

首先，無菌操作是關鍵。一定要保持操作環境的清潔，避免細菌或霉菌污染，否則實驗就會失敗。

其次，選擇適合的培養基和血清也很重要。不同細胞對培養基和血清的需求不同，所以要根據細胞類型來選擇合適的培養基和血清。

另外，也是細胞培養中的成分。要新鮮配制，在貯存過程中也要定期補充。

在細胞培養過程中，靜置培養也是非常重要的。細胞在消化分離后需要一定的時間來適應新環境，所以在這段時間內要避免頻繁取出培養瓶觀察。

此外，消化時間也要控制得當。通常消化至肉眼可見微小組織顆粒即可，過長的消化時間會導致細胞損傷加重，影響細胞培養成活率。

最后，對于一些特殊類型的細胞，可能需要添加一些特殊的生長因子來促進細胞生長和增殖。但需要注意的是，這些生長因子的費用通常較高。

一、細胞基本屬性

細胞名稱：人肝外膽管上皮細胞

組織來源：膽管組織

種屬來源：人

細胞簡介：人肝外膽管上皮細胞分離自肝外膽管組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也制造消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。臨床上常見的膽管病變如膽道閉鎖、先天性膽總管囊腫、原發性硬化性膽管炎等，都是以膽管上皮細胞為病變的靶位，引起膽管上皮的損傷。了解正常膽管上皮細胞的生物學特征和病變膽管上皮細胞的病理生理學特征對研究膽管病變的發病機制、診斷和治療具有重要意義。

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

生長特性：貼壁

細胞形態：上皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

二、使用方法：

人肝外膽管上皮細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈上皮細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

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