一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞詳述

膽囊，是位于右方肋骨下肝臟后方的梨形囊袋構(gòu)造，有濃縮和儲(chǔ)存膽汁之作用。膽囊壁由粘膜、肌層和外膜三層組成。

膽囊內(nèi)面以粘膜覆蓋，有發(fā)達(dá)的皺襞。膽囊收縮排空時(shí)，皺襞高大而分支；膽囊充盈時(shí)，皺襞減少變矮。粘膜上皮為單層柱狀，內(nèi)分散分部著少量杯狀細(xì)胞。膽囊粘膜細(xì)胞具有典型的吸收型細(xì)胞的特征，具有較強(qiáng)的吸收和濃縮功能，上皮細(xì)胞吸收膽汁中的水和無機(jī)鹽，經(jīng)細(xì)胞側(cè)面的質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)至上皮細(xì)胞間隙內(nèi)，吸收的水和無機(jī)鹽通過基膜進(jìn)入固有層的血管和淋巴管內(nèi)。同時(shí)，膽囊粘膜亦有分泌功能，分泌粘液。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項(xiàng)：  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞特性

1) 細(xì)胞來源于人膽囊組織。

2) 細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白19（CK-19）免疫熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

二、使用方法：

客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

公司產(chǎn)品僅用于科研關(guān)于原代細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項(xiàng)。原代細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)非常重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，掌握好這些注意事項(xiàng)，能讓你的實(shí)驗(yàn)更順利。

首先，無菌操作是關(guān)鍵。一定要保持操作環(huán)境的清潔，避免細(xì)菌或霉菌污染，否則實(shí)驗(yàn)就會(huì)失敗。

其次，選擇適合的培養(yǎng)基和血清也很重要。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基和血清的需求不同，所以要根據(jù)細(xì)胞類型來選擇合適的培養(yǎng)基和血清。

另外，也是細(xì)胞培養(yǎng)中的成分。要新鮮配制，在貯存過程中也要定期補(bǔ)充。

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，靜置培養(yǎng)也是非常重要的。細(xì)胞在消化分離后需要一定的時(shí)間來適應(yīng)新環(huán)境，所以在這段時(shí)間內(nèi)要避免頻繁取出培養(yǎng)瓶觀察。

此外，消化時(shí)間也要控制得當(dāng)。通常消化至肉眼可見微小組織顆粒即可，過長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷加重，影響細(xì)胞培養(yǎng)成活率。

最后，對(duì)于一些特殊類型的細(xì)胞，可能需要添加一些特殊的生長(zhǎng)因子來促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。但需要注意的是，這些生長(zhǎng)因子的費(fèi)用通常較高。

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