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貨號	A01X1186	規(guī)格	1×106
種屬來源	豬	用途	僅供科研實驗
品牌	撫生

一、細(xì)胞基本屬性

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	商品貨號
豬扁桃體上皮細(xì)胞永生化	1×106	A01X1186

細(xì)胞詳述

扁桃體是一對扁卵圓形的淋巴器官，位于扁桃體窩內(nèi)。按其位置分別稱為腭扁桃體、咽扁桃體和舌扁桃體。其中，腭扁桃體最大，通常所說的扁桃體即為腭扁桃體。

腭扁桃體呈卵圓形，粘膜一側(cè)表面覆有復(fù)層扁平上皮，其主要由上皮細(xì)胞構(gòu)成。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項：收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞特性

1) 組織來源于實驗動物的正常扁桃體組織。

2) 細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）或細(xì)胞角蛋白-19（CK-19）免疫熒光染色為陽性。經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

3) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

4) 細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

二、使用方法：

客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2），多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

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