澤瀉探針法PCR鑒定試劑盒試驗循環(huán)參數(shù)

時間：2025/3/17閱讀：18

澤瀉探針法PCR鑒定試劑盒試驗循環(huán)參數(shù)：
1. 預(yù)變性（Initial denaturation）
模板DNA變性與PCR酶的激活對PCR能否成功至關(guān)重要，建議加熱時間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時間為兩分鐘。

2. 循環(huán)中的變性步驟
循環(huán)中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列變性，可能的情況下可縮短該步驟時間，變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不好，易造成擴增失敗。

3. 引物退火（Primer annealing）
退火溫度需要從多方面去決定，一般根據(jù)引物的Tm值為參考，根據(jù)擴增的長度適當(dāng)下調(diào)作為退火溫度。然后在此次實驗基礎(chǔ)上做出預(yù)估。

退火溫度對PCR的特異性有較大影響。

4. 引物延伸
引物延伸一般在72℃進行（Taq酶最適溫度）。但在擴增長度較短且退火溫度較高時，本步驟可省略
延伸時間隨擴增片段長短而定，一般推薦在1000 bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生設(shè)定為1 min/kbp。

5. 循環(huán)數(shù)
大多數(shù)PCR含25-40循環(huán)，過多易產(chǎn)生非特異擴增。

6. 最后延伸
在最后一個循環(huán)后，反應(yīng)在72℃維持5-15分鐘．使引物延伸，并使單鏈產(chǎn)物退火成雙鏈。

九九热免费在线观看_毛片女人毛片一级毛片毛片_欧美在线视频一区二区_在线免费看av片_精品视频9999_99视频网站

澤瀉探針法PCR鑒定試劑盒試驗循環(huán)參數(shù)

會員登錄

收藏該商鋪

提示