細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡介：

小鼠氣管軟骨分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。軟骨由軟骨細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)組成。軟骨內(nèi)的基質(zhì)呈凝膠狀態(tài)，具有較大韌性。軟骨是以支持作用為主的結(jié)締組織。軟骨內(nèi)不含血管和淋巴管，營養(yǎng)物由軟骨膜內(nèi)的血管中滲透到細(xì)胞間質(zhì)中，再營養(yǎng)骨細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞間質(zhì)的不同可把軟骨分為3種，即透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨。透明軟骨的基質(zhì)是由膠原纖維、原纖維和周圍無定形的基質(zhì)組成。在胚胎時(shí)期有臨時(shí)支架作用，后來這種作用被骨代替。成人的透明軟骨主要分布在氣管和支氣管壁中、肋骨的胸骨端和骨的表面（關(guān)節(jié)軟骨）。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠氣管軟骨采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠氣管軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每3-4天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠氣管軟骨體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠彈性蛋白(ELN)試劑盒 ，英文名： ELN ELISA Kit

Porcine thrombomodulin (TM) ELISA Kit 豬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)試劑盒

ELISA 小鼠雄激素結(jié)合蛋白(mouse ABP) 分裝

CLIAKitforLPO(Humanlipidperoxlde)ELISAKit人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶

通用細(xì)胞載玻片制備試劑盒50次

ELISAKitLH雞促黃體激素

血栓前體蛋白   英文名稱：   thrombus precursor protein   英文縮寫：   TpP

可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1   英文名稱：   soluble iggering receptor expressed on myeloid cells-1   英文縮寫：   sEM-1

胸苷酸合成酶   英文名稱：   thymidylate syhase   英文縮寫：   TS

敏感蛋白-1   英文名稱：   thrombospondin 1   英文縮寫：   TSP-1

叉頭相關(guān)結(jié)構(gòu)域包含蛋白1抗體

ATP依賴的干擾素反應(yīng)蛋白1抗體

XCL1重組小鼠 XCL1 蛋白 Protein

白介素2(IL2)重組蛋白 Recombinant Interleukin 2 (IL2)

CKB重組人 CKB / Creatine kinase B type 蛋白 Protein

CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113， His 標(biāo)簽)

IL2RA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL2RA 蛋白

Apelin receptor/APJ receptor Apelin receptor抗原 0.5mgApelin receptor/APJ receptor Apelin receptor抗原

CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113， His 標(biāo)簽)

EPHA4重組小鼠 EphA4 / HEK8 蛋白 Protein

CD70 Protein Rat 重組大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

MFGE8重組人 MFG-E8 / lactadherin / MFGE8 蛋白 Protein

小鼠氣管軟骨細(xì)胞小鼠脂多糖(LPS)pcr檢測試劑盒

Human ai hepatitis B virus core aibody (HBcAb) ELISA Kit 人抗乙型肝病毒核心抗體(HBcAb)試劑盒

HumandeoxyribonucleaseⅠ,DNase-ⅠELISAKit 人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)pcr檢測試劑盒分裝

CLIAKitforAAA(Humanai-albuminaibody)ELISAKit人抗白蛋白抗體

中和液100毫升

MouseneuropeptideY,NP-YELISAKit小鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)試劑盒規(guī)格：96T/48T

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取