細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡介：

小鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成。神經(jīng)元是視細(xì)胞層，專司感光，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上，而視錐細(xì)胞則在中心凹處多。層叫雙節(jié)細(xì)胞，約有10到數(shù)百個視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力強(qiáng)。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在視網(wǎng)膜血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。由于從不同的組織和器官獲得的內(nèi)皮細(xì)胞具有不同的特性，在腦和視網(wǎng)膜中，這些內(nèi)皮細(xì)胞具有內(nèi)屏障的功能，在調(diào)節(jié)血管生理狀態(tài)，釋放血管活性物質(zhì)以及新生血管的形成中發(fā)揮著重要作用，體外分離培養(yǎng)RCEC對研究視網(wǎng)膜血管性疾病發(fā)生發(fā)展的病理生理機(jī)制以及疾病的早期防治具有重要臨床意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠白介素2(IL-2)試劑盒 ，英文名： IL-2 ELISA Kit

Mouse bladder tumor aigen (BTA) ELISA Kit 小鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)試劑盒

ELISA 小鼠白介素-3(mouse IL-3)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIL-6ELISAKIT大鼠白介素6

通用型雞敗血支原體(Mycoplasma;MG)試劑盒20次

ELISAKitIAA大鼠胰島素自身抗體

兔子促甲狀腺素試劑盒   兔子促甲狀腺素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子促甲狀腺素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子促甲狀腺素試劑盒、兔子促甲狀腺素試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

兔子促黃體激素試劑盒   兔子促黃體激素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子促黃體激素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子促黃體激素試劑盒、兔子促黃體激素試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

兔子雌二醇試劑盒   兔子雌二醇試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子雌二醇試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子雌二醇試劑盒、兔子雌二醇試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1試劑盒   兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1試劑盒、兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體

小鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA 試劑盒

Rat neuropeptide Y (NP-Y) ELISA Kit 大鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)試劑盒

Humaarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit 人抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanCaspase3,Casp-3試劑盒人胱天蛋白酶3(Casp-3)試劑盒

轉(zhuǎn)基因棉花MON88913品系試劑盒20次

humansinglesandedDNAAibody,ssDNAELISAKit人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)試劑盒

強(qiáng)直性肌營養(yǎng)不良相關(guān)蛋白9抗體

CLEC5A重組食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 蛋白  Protein

IL-4(Interleukin-4 0.5mgIL-4(Interleukin-4)human peptide 白介素4抗原

FAM45A重組人 CAMK1 / CaMKI-alpha 蛋白 Protein

GNAZ Protein Human 重組人 PFK1 / PFKM 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

CPB2 Protein Mouse 重組小鼠 Carboxypeptidase B2 / CPB2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

小鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞IL-4(Interleukin-4 0.5mgIL-4(Interleukin-4)human peptide 白介素4抗原

GNAZ Protein Human 重組人 PFK1 / PFKM 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

CLEC5A重組食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 蛋白  Protein

CPB2 Protein Mouse 重組小鼠 Carboxypeptidase B2 / CPB2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FAM45A重組人 CAMK1 / CaMKI-alpha 蛋白 Protein

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取