細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔海馬神經(jīng)元分離自海馬體；海馬體(Hippocampus)，又名海馬回、海馬區(qū)、大腦海馬，海馬體主要負(fù)責(zé)記憶和學(xué)習(xí)。海馬神經(jīng)元細(xì)胞是海馬區(qū)的主要細(xì)胞組成，主要功能是參與近期記憶、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié)、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng)，在學(xué)習(xí)、記憶、情緒反應(yīng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理變化等方面有重要作用，而且海馬組織是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的神經(jīng)干細(xì)胞聚集區(qū)，具有高度序化板層結(jié)構(gòu)和神經(jīng)元相對(duì)獨(dú)立分布的特點(diǎn)，境界相對(duì)清晰，便于取材，因此，海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究者當(dāng)做理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)是研究神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)特性和外源干擾因素作用(細(xì)胞因子)的有效細(xì)胞模型，其在神經(jīng)生物學(xué)，發(fā)育生物學(xué)體外實(shí)驗(yàn)研究中已被廣泛應(yīng)用。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔海馬神經(jīng)元采用消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔海馬神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.125%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠腫瘤壞死因子配體超家族成員12(TNFSF12)試劑盒 ，英文名： TNFSF12 ELISA Kit

Mouse soluble Endoglin (ENG/sCD105) ELISA Kit 小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)試劑盒

Mouseeosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanImmunoglobulinG,IgGELISAKitG

微型RNA(miRNA)文庫構(gòu)建技術(shù)服務(wù)1個(gè)樣本

ELISAKitMDC/CCL22大鼠巨噬細(xì)胞來源的趨化因子

小鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子 -1 (mouse sICAM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D

小鼠干擾素 - a (mouse IFN- a )   作用：   ELISA   規(guī)格：   72T   美國 R&D

小鼠干擾素 - g (mouse IFN- g )   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   法國 Diaclone

小鼠免疫球蛋白 E (mouse IgE)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 ADI

肌動(dòng)蛋白抑制因子1抗體

小鼠牛小腸堿性0酸酶(CIAP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human coagulation factor III (F III) ELISA Kit 人Ⅲ(FⅢ)試劑盒

HumanGliadinIgAELISAKit 人麥角蛋白IgA(Gliadin-IgA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Human15-lipoxygenase,15-LO/LOX試劑盒人15脂加氧酶(15-LO/LOX)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒20次

MouseAquaporin3,AQP-3ELISAKit小鼠水通道蛋白3(AQP-3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2抗體

C5重組人 Complement C5a 蛋白 Protein

角蛋白4(KRT4)重組蛋白 Recombinant Keratin 4 (KRT4)

PLA2G2D重組人 PLA2G2D / Phospholipase A2 IID 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CSH1 Protein Human 重組人 Placental Lactogen / CSH1 蛋白

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

兔海馬神經(jīng)元細(xì)胞角蛋白4(KRT4)重組蛋白 Recombinant Keratin 4 (KRT4)

CSH1 Protein Human 重組人 Placental Lactogen / CSH1 蛋白

C5重組人 Complement C5a 蛋白 Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

PLA2G2D重組人 PLA2G2D / Phospholipase A2 IID 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。