簡述牛腫瘤壞死因子αELISA檢測試劑盒實驗操作
　　
　　試驗原理：
　　
　　TNF-α試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知TNF-α濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將TNF-α和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中TNF-α的濃度呈比例關系。
　　
　　操作注意事項：
　　
　　l試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
　　
　　l實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
　　
　　l不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
　　
　　l使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
　　
　　l使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
　　
　　l底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。牛腫瘤壞死因子αELISA試劑盒底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
　　
　　l加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
　　
　　按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
　　
　　安全性：
　　
　　1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
　　
　　2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
　　
　　3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
　　
　　操作步驟：
　　
　　1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
　　
　　2．根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
　　
　　3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
　　
　　4．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
　　
　　5．每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
　　
　　6．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，牛腫瘤壞死因子αELISA試劑盒振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
　　
　　7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
　　
　　8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
　　
　　在450nm波長處測定各孔的OD值。
　　
　　牛腫瘤壞死因子αELISA試劑盒