黃曲霉毒素M1(AFM1)ELISA檢測試劑盒
一、概要
黃曲霉毒素是一類真菌(如黃曲霉和寄生曲霉)的有毒的代謝產物,它們具有很強的致癌性,主要存在于谷物、堅果、棉籽以及一些和人類血液,動物飼料相關的產品中。黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產物,也是一種強致癌物質。牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。Aflatoxin M1的檢測方法有液相色譜法(HPLC),薄層層析法(TLC)等。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。
本試劑盒是應用ELISA技術的新一代真菌毒素檢測產品,操作時間短于60min,能zui大限度地減少操作誤差和工作強度。
二、試驗原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在酶標板微孔條上預包被黃曲霉毒素M1抗原,樣本中黃曲霉毒素M1和此抗原競爭黃曲霉毒素M1抗體,同時黃曲霉毒素M1抗體與酶標二抗相結合,經TMB底物顯色,樣本吸光值與其含有的黃曲霉毒素M1成負相關,與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數,即可得出樣品中黃曲霉毒素M1的含量。
黃曲霉毒素M1(AFM1)ELISA檢測試劑盒
三、適用范圍
可定性、定量檢測牛乳及其他乳制品等樣本中的黃曲霉毒素M1。
四、使用單位需自備的設備及試劑
設備:
┅┅微孔板酶標儀450nm/630nm
┅┅振蕩器
┅┅離心機
┅┅天平:感量0.01g
┅┅微量移液器:單道 20ml~200ml、200ml~1000ml、多道 250ml
┅┅刻度移液管:25ml
┅┅洗耳球
┅┅三角瓶:100ml
┅┅聚苯乙烯離心管:10ml/50ml
試劑:
----去離子水
五、提供的材料與試劑
組份名稱
酶標板
高濃度標準品(810ppb)
AFM1酶標物
AFM1抗試劑
底物液A液
底物液B液
終止液
濃縮洗滌液(10×)
AFM1濃縮樣品/標品稀釋液(4×) 注:試劑盒檢測范圍0.05ppb~4.05ppb
黃曲霉毒素M1(AFM1)ELISA檢測試劑盒
六、溶液的配制
七、牛奶、奶粉前處理
八、檢測步驟
測定前應須知:
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫(20~25℃)。
2、使用之后立即將所有試劑放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再現性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋板膜封住微孔板。
5、黃曲霉毒素M1可致癌,應戴手套操作。
九、結果判定
結果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,而定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含黃曲霉毒素B1成負相關。
1、用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設樣本1的吸光度值為0.659,樣本2的吸光度值為1.525,標準液吸光度值分別是:0ppb為2.101;0.05ppb為1.738;0.15ppb為1.313;0.45ppb為0.831;1.35ppb為0.469;4.05ppb為0.262。則樣本1的濃度范圍是0.45ppb~1.35ppb;樣本2的濃度范圍是0.05ppb~0.15ppb 再乘以其對應的稀釋倍數即可得出樣本中黃曲霉毒素M1的濃度范圍。
2、定量分析
十、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒檢測下限:
0.05ppb
回收率:
牛奶:90±15%
奶粉:85±15%
精密度:
試劑盒的變異系數均小于10%
十一、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況,則會出現標準曲線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒;也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
保存試劑盒于2~8℃,不要冷凍,將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象
發色試劑有任何顏色表明發色劑變質,應當棄之。0標準的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質。
8、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長反應時間到30min(或更長)。反之,則減短反應時間。
9、濃縮洗滌液如有結晶屬正常現象,請加熱溶解后使用。
10、該試劑盒*反應溫度為25℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
十二、貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產品有效期為12個月。
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