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實驗以人脂肪間充質干細胞作為基因轉染的靶細胞，構建VEGF165重組腺病毒載體，利用重組腺病毒載體將其攜帶導入ADSCs中，檢測外源基因在ADSCs中的及轉染后細胞生物特性的變化。旨在通過基因轉染這一途徑將VEGF165與ADSCs結合起來，從而為探索一種更加有效的構建組織工程化脂肪的方法，提供實驗基礎.
目的：1、從人脂肪組織提取脂肪間充質干細胞，了解其生物學特性；2構建VEGF165腺病毒載體；3、以EGFP作為報告基因，篩選腺病毒*感染復數，為進一步進行攜帶外源基因的轉染探索轉染條件；4、研究攜帶人VEGF165腺病毒載體轉染脂肪間充質干細胞后，外源基因的表達情況；5、研究ADSCs在基因轉染前后細胞活性與增殖能力的變化，為下一步進行體內回植提供研究基礎。
方法：1.采用膠原酶消化貼壁法提取人脂肪間充質干細胞，并傳代培養以流式細胞術鑒定其表面標志，測定培養細胞的生長曲線。2.采用Ad5重組腺病毒載體以不同梯度的MOI(Multiplicity of Infection)值轉染人脂肪間充質干細胞，以EGFP作為報告基因，熒光倒置顯微鏡觀察并用圖像分析法測定轉染效率，篩選確定*轉染值。3.體外培養并擴增人脂肪間充質干細胞，試驗組用構建好的AD5-VEGF165-IRES-EGFP進行基因轉染，對照組只加入培養液。收集各組第1、3、5、7、9、至19天的上清液，采用ELISA試劑盒測定培養上清液中VEGF165的濃度，各組進行比較。4.實驗組：用AD5-VEGF165-IRES-EGFP進行基因轉染，陽性對照組：用AD5-EGFP空載體進行轉染；陰性對照組只加入培養液。用MTT法檢測各組細胞的活性，以流式細胞術檢測各組細胞的增殖活性、細胞周期。所有數據進行統計學分析。
結果：1.膠原酶消化法是一種有效、方便、快捷的ADSCs分離方法，所分離的細胞能傳十代以上，具有干細胞特性，ADSCs的特異性標志陽性，不表達造血干細胞的特異性標志；流式細胞術結果CD106陰性，而CD49d陽性。2、重組腺病毒載體具有較高的轉染效率，當轉染復數(MOI)值為400，轉染效率可達90％以上。3.ELISA法檢測培養細胞上清液中VEGF165，轉染組可見VGEF165高表達(3312.157±170.378)，空白對照組檢測到微量VEGF165表達：轉染組和未轉染組間顯示顯著性差異(P<0.05)。4.經VEGF165基因轉染的ADSCs和轉染空載體組及未轉染組吸光度值無顯著性差異(P>0.05)。經基因轉染的ADSCs與轉染空載體、未轉染的ADSCs相比較，G1期細胞所占百分比無顯著性差異，反映增殖活力的增殖指數Pr1(包括G1/G2期和M期)也無顯著性差異(P>0.05)；攜帶外源基因腺病毒轉染對細胞的活性與增殖周期無顯著影響。
結論： 1.人脂肪組織中存在具有多向分化潛能的干細胞，且含量豐富，生物學性能穩定。膠原酶消化法可以得到相對較純的問充質干細胞。 2.重組腺病毒載體是轉染人脂肪間充質干細胞的較理想載體，恰當的MOI值可提高轉染效率。 3.重組腺病毒載體可成功地將VEGF基因轉染入人ADSCs細胞中，hADSCs可以在體外持續穩定的表達目的蛋白；腺病毒轉染未影響ADSCs的細胞活性和細胞增殖周期。從而可以將促血管生長因子治療和干細胞移植有效的結合起來。
