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南京信帆生物技術有限公司 |  資料大小 |
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一、測定原理：
在一定濃度的混濁菌液中，由于溶菌酶能水解細菌細胞壁上肽聚糖使細菌裂解而濃度降
低，透光度增強，故可以根據透光度變化來推測溶菌酶的含量。
二、試劑組成及配制 (30T/28 樣)
1、試劑組成：
試劑一：菌粉，5mg×4 支，2～8℃干燥保存，有效期6 個月。
試劑二：菌粉溶劑，100ml×1 瓶，2～8℃保存，并每月放微波爐中溫消毒20 秒，有效期6
個月。
試劑三：標準品，粉劑2mg×1 支（活力為8 萬單位/mg），2～8℃干燥保存，有效期6 個月。
[注]：試劑盒嚴格按照上述方法保存有效期可延至一年。
2、試劑配制：
（1）、貯備菌液的配制：
取5mg/支的菌粉1 支，倒入勻漿管中，加菌粉溶劑1ml，輕輕緩慢上下旋轉研磨
3 分鐘（切勿濺出），即為貯備菌液，將其取出后置2～8℃冰箱密封保存一周左右。
（2）、應用菌液的配制：
按貯備菌液:菌粉溶劑=1:19 進行配制，需多少配多少。剩下的應用菌液2～8℃可
保存一周左右。是現用現配，用時搖勻。
（3）、標準品的配制：
①、標準品貯備液的配制：
每支準確加雙蒸水1.0ml 配成2mg/ml 的標準品貯備液。2～8℃可保存7～10 天。
②、標準品應用液的配制：
臨用時按標準品貯備液∶雙蒸水=1∶799 比例稀釋成2.5μg/ml（即200U/ml）的
標準品應用液，需多少配多少。2～8℃保存，可保存7～10 天。
附錄Ⅰ：自身對照法測定溶菌酶
（適用于樣本數量較少，或者樣本有混濁或有顏色，如血液紅色）
[注]：本法用分光光度計530nm 處,1cm 光徑比色皿測得是樣本或標準的透光度值
1、操作步驟
①、將配制好的應用菌液，標準應用液及所需檢測的樣本均放入37℃水浴箱中預溫5 分鐘
以上。使菌液，標準液及檢測樣本的溫度達到37℃。
②、將可見分光光度計于530nm 處,1cm 光徑比色皿,以雙蒸水調透光度100% (比色皿準備兩
只,一只用于調透光度100%,一只用于測定)。
③、往相應編號的試管中加入0.2ml 待測樣本，取2ml 應用菌液迅速沖入試管中，立即混
勻并計時。(標準品應用液取0.2ml 雙蒸水,加入2ml 應用菌液,其它操作與測定相同)
④、迅速倒入比色皿中在可見分光光度計530nm處比濁，5 秒時讀取透光度值T0, 比色皿不
要取出，在2 分5 秒時讀取透光度值T2；
[注]：如5 秒時來不及讀數，可20 秒時讀取調透光度值T0,在2 分20 秒時讀取透光度值T2，標準管需同樣
操作。
⑤、求出2 次透光度的差值（△T= T2-T0）。
[注]：用同一比色皿每檢測一個樣本后均要用雙蒸水沖洗干凈，才可再放第二個樣本或標準品應用液。
