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南京信帆生物技術有限公司 |  資料大小 |
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人外周血白細胞分離液試劑盒說明書
規格：200 mL/kit
保存：本產品對光敏感，應該室溫避光儲存，保質期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。
試劑盒組成：
各種動物外周血白細胞分離液 200mL
細胞洗滌液 200mL
紅細胞裂解液 100mL
操作步驟：
1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液。
2. 在離心管中加入適量分離液（血液體積小于5mL時，加入5mL分離液；大于等于5mL，加入等體
積分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果），將血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時間較長，在離心之前出現紅細胞成團下沉屬正常現象。）
3. 室溫，水平轉子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所
需的離心力越大，離心時間越長，zuijia的分離條件需摸索，離心轉
速zui大不超過1200g）。
4. 離心后將出現明顯的分層：zui上層是稀釋的血漿層；血漿與分離液之間是淋巴細胞層；分離液中為粒細胞層（個體差異或者是分離條件不同，粒細胞層可能分離不明顯）；zui下層為紅細層。
5. 小心的吸取淋巴細胞層及分離液層細胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細胞洗滌液洗滌細胞。250g，離心10min（如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液）
6. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。
7. 重復步驟6
8. 棄上清，細胞重懸備用。
注意事項：
A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免
微生物污染。。
B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是
溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。
C. 血液樣本為新鮮抗凝血（采血2 h以內），為保持淋巴細胞的活性，應避免冷凍和冷藏。
D. 血液樣本不需稀釋，直接進行分離即可。
E. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養液，其成分會導致血細胞凝集大大降低細胞得率及純度
人外周血白細胞分離液試劑盒說明書
