名  稱：人Ⅳ型膠原 (ColⅣ) ELISA試劑盒

規  格：96T/48T

性  狀：液體

貯  藏：避光防潮保存

包  裝：盒裝

用  途：用于測定血清、血漿、組織及相關液體樣本中的含量或活性

提  示：我司ELISA檢測試劑盒僅供科研實驗，不得用于其他用途，使用前仔細閱讀ELISA試劑盒說明書

試驗原理：

酶聯免疫吸附實（EISA）即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術，該技術用于檢測大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優點。

操作步驟：

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔，空白孔加標準品&樣品稀釋液 100μL，余孔分別加標準品或待測樣品 100μL，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，給酶標板覆膜，37℃孵育 90 分鐘，為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌，每個孔中加入生-物素化抗體工作液 100μL（在使用前15 分鐘內配制），酶標板加上覆膜，37℃溫育 1 小時。

3. 棄去孔內液體，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分鐘，大約 350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。

4. 每孔加酶結合物工作液（臨用前 15 分鐘內配制）100μL，加上覆膜，37℃溫育30 分鐘。

5. 棄去孔內液體，甩干，洗板5 次，方法同步驟3。

6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15 分鐘左右（根據實際顯色酌情縮短或延長，但不可超過30 分鐘，當標準孔出現明顯梯度時，即可終止）。

7. 每孔加終止液 50μL，終止反應，此時藍色立轉，終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。

8. 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD 值），應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。

9. 實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存。

人Ⅳ型膠原 (ColⅣ) ELISA試劑盒

實驗室注意事項：

1、有試劑不能與皮膚直接接觸。

2、務必使用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，不準用同一種工具同時連續取用多種試劑。

3、取完一種試劑后，應將工具洗凈、擦干后，方可取用另一種試劑。

4、試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后將瓶放回原處。

5、已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內。