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人前列腺素E2(PGE2)ELISA Kit實驗原理

閱讀:559發布時間:2012-09-03

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人前列腺素E2(PGE2)Elisa試劑盒實驗原理

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗LEP抗體的微孔中依次加入標本或標準品、*化的抗LEP抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的LEP呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔)。
2. 標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. *標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. *標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1100
7. 辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1100
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

人前列腺素E2(PGE2)Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材

1. 標準規格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養箱
4. 干凈的試管和Eppendof
5. 系列可調節移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器
6. 蒸餾水,容量瓶等
標本的采集及保存
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20-80保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20-80保存,但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20-80保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

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