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技術(shù)文章

PCR儀液污染處理方法

閱讀：334發(fā)布時(shí)間：2016-7-14

    ELISA試劑盒PCR儀是一種利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專(zhuān)一性的連鎖復(fù)制。因而，在PCR儀使用時(shí)對(duì)于環(huán)境要求很高，為了避免實(shí)驗(yàn)未完成前可能出現(xiàn)的任何污染反應(yīng)液的情況，應(yīng)該了解關(guān)于反應(yīng)液受到污染時(shí)，反應(yīng)液處理方法：
    紫外照射法：未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液進(jìn)行紫外照射，注意事項(xiàng)與方法同上述UV照射法；
    內(nèi)切酶法：選擇識(shí)別4個(gè)堿基的內(nèi)切酶（如Msp I和Taq I等），可同時(shí)選擇幾種，以克服用一種酶只能識(shí)別特定序列的缺陷，室溫作用1h 后加熱滅活進(jìn)行PCR；
    DNase I法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室溫反應(yīng)30 min后加熱滅活，然后加入模板和Taq聚合酶進(jìn)行正常PCR擴(kuò)增。該方法的優(yōu)點(diǎn)是不需要知道污染DNA的序列；
    g射線(xiàn)輻射法：1.5kGy的輻射可*破壞0.1ng基因組DNA，2.0 kGy可破壞104拷貝的質(zhì)粒分子，4.0 kGy仍不影響PCR，但高于此限度會(huì)使PCR擴(kuò)增效率下降。引物可受照射而不影響PCR，g射線(xiàn)是通過(guò)水的離子化產(chǎn)生自由基來(lái)破壞DNA的。
    PCR儀的使用要求很高，因此不允許在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)一絲錯(cuò)誤，尤其是任何與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的物品的污染情況。上述關(guān)于PCR儀反應(yīng)液污染情況的及時(shí)處理方法一定能幫助您在實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)類(lèi)似情況時(shí)及時(shí)處理。


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