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研域（上海）化學試劑有限公司


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免疫組化染色問題解答

閱讀：961發布時間：2011-05-04

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    研域（上海）化學試劑有限公司

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免疫組化染色問題解答

1非特異性背景染色　　

原因 解決方法　　

a 操作過程中沖洗不充分 每步沖洗3次每次5分鐘　　

b 組織中含過氧化物酶未阻斷 可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長　　

c 組織中含內原性* 正常非免疫動物血清再封閉　　

d 血清蛋白封閉不充分 延長血清蛋白封閉時間

2、染色陰性　　

原因 解決方法　　

a 操作步驟錯誤 應重試 設陽性對照　　

b 組織中無抗原 設陽性對照以驗證試驗結果　　

c 一抗與二抗種屬連接錯誤 仔細確定一抗二抗種屬無誤
 

3、染色弱　　

原因 解決方法　　

a 抗體濃度過低、孵育時間過短 提高抗體濃度、孵育時間不能少 于60分鐘　　

b 試劑超過有效使用時間 應更換試劑　　

c 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液　　使試劑稀釋 （應防止切片干燥）　　

d 室溫太低 低于15度 要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過夜　　

e 蛋白封閉過度 封閉不要超過12分鐘　　

 


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